Техник проведения анализа

Опыт № 1 Отбор среднего образца

Средний образец сена отбирают в количестве 5 кг от каждых 25 тонн однородной партии непрессованного и 50 тонн прессованного сена. Отобранные пласты и пучки сена складывают на брезент слоями один на другой и осторожно без ломки растений перемешивают, а затем из разных мест отбирают 500г для анализа.

Опыт №2 Определение цвета сена

Цвет сена определяют путем осмотра образца сена, взятого из внутренней части скирды или кипы сена. Хорошо убранное и сохраненное сено злаковых растений имеет зеленый цвет, а бобовых - светлобурый. Заливное сено имеет цвет от зеленного до темнозеленного. Сено, попавшее под дождь, приобретает серый, бледно-желтый или буравато-темеый цвет. Выцветшее (соломистое) сено указывает на то, что укос был поздним.

Опыт №3 Определение запаха сена

Хорошо убранное и правильно хранившееся сено всегда имеет ароматный запах. Сено, попавшее под дождь, и долго лежащее в копнах и в валках, теряет аромат и зеленную окраску, оно приобретает затхлый запах. Если при анализе определить запах сена невозможно, то часть сена помещают в стакан, обливают до полного смачивания горячей водой, покрывают стеклом и через 2-3 минуты определяют запах.

Опыт № 4 Определение запыленности сена

Пучки сена взятого из скирды, встряхивают. Пыльное сено дает при этом облачко пыли.

Опыт №5 Определение влажности сена

Влажность сена на месте хранения определяют наружным осмотром и путем скручивания пучка сена в жгут. Сухое сено (Влажность менее 15%) при этом ломается. Сено содержащее 15-17% влаги при скручивании не ломаются. При влажности 20%-выделяется влага на поверхности стеблей. Сено должно быть средней сухости и иметь не более 15-17% влажности.

Опыт №6 Определение ботанического состава

Исследуемый образец сена разбирают по составу трав на группы: злаковые, бобовые, прочие съедобные травы, несъедобные травы, ядовитые и вредные растения. В сене не должно содержаться более 1% вредных и ядовитых растений.

Контрольные вопросы:

1 Какие растения могут вызывать отравления животных?

2 Какое значение имеет качество сена?

3 Какие показатели характеризуют доброкачественность сена?

Тема: Общая схема и порядок химико-токсикологического исследования

Цель занятия: Изучить общую схему и порядок химико-токсикологического анализа.

Перед началом исследования химик-токсиколог обязан детально ознакомиться с сопроводительными документами и убедится в достоверности присланного материала путем осмотра цельности упаковки, надписей и печатей. Иногда есть необходимость выяснять, исключены ли инфекционные заболевания.

После осторожного вскрытия упаковок проводят внешний осмотр проб, результаты которого подробно заносят в рабочий журнал.

Обычно присланный материал ориентировочно разделяют на три части (особенно при массовых отравлениях): одну часть отпечатывают для хранения не менее 6 месяцев; две части используют для качественного и количественного определения веществ. С целью предотвращения химического превращения, материал необходимо исследовать в день поступления, особенно в случаях прижизненного подтверждения диагноза.

Анализ начинают с составления плана исследований, который определяется результатами изучения сопроводительных документов и внешнего осмотра проб. От правильности составления плана во многом зависит оперативность и точность исследований. При этом необходимо учитывать, что объекты анализа в большинстве случаев неповторимы.

Ориентирами в выборе направления исследований могут быть специфический запах (чеснока при отравлении фосфидом цинка, аммиака - карбамидом, миндаля – цианидами), окраска (сине-зеленая содержимого кишечника при отравлениях солями меди, серовато-черная соединениями свинца, желтая- пикриновой или азотной кислотами, соединениями хрома), реакция материала кислая (при отравлении кислотами, солями сильных кислот и тяжелых металлов) или щелочная ( при отравлении едкими щелочами, солями аммония и карбамидом, карбонатами и силикатами), наличие посторонних включений (кристаллы солей и пестицидов, кусочки свинца, семена и другие части ядовитых растений), которые осторожно отбирают и тщательно изучают при помощи лупы, иногда микроскопа и химических реакций.

Каждый присланный объект исследуют отдельно при помощи чувствительных и специфических методов и реакции, которые предварительно со всеми тонкостями освоены токсикологом. Иногда целесообразно провести параллельно контрольные исследование с чистым веществом, наличие которого предполагается в объекте. Но во всех случаях ставят «холостой» опыт с теми же реактивами и последовательностью реакции, но без определяемого вещества. В случае появления каких-либо отклонений реактивы подвергают дополнительной очистке.

В зависимости от степени чистоты различают химические реактивы следующих квалификации: чистый-ч. ( с этикеткой или полосой на этикетке красного цвета), чистый для анализа-ч.д.а.- ( синего цвета), химический чистый- х.ч. ( зеленого цвета), особо чистый- ос.ч. ( желтого цвета) и прочие реактивы (светло-коричневого цвета). На посуде с ядовитыми реактивами наклеена дополнительная желтая этикетка с надписью «Огнеопасно»; взрывоопасными- голубая с надписью «Взрывоопасно», несовместимыми с водой –зеленая с надписью «Беречь от воды».

В случаях отсутствия каких-либо сведений о предполагаемой причине отравления животных химик- токсиколог должен проводить анализ по предполагаемой примерной схеме; выявление металлических ядов и мышьяка, изолируемых минерализацией; алкалоидов и сапонинов в кормах; цианидов, изолируемых отгонкой с водяным паром; нитратов, нитритов, карбамида и натрия хлорида; соединений фтора; ТМТД и ртуть органических протравителей зерна; ФОС и ХОС.

Иногда при отсутствии специфических методов обнаружения яда проводят биопробу на животных, рыбах или насекомых.

Все химические исследования по каждой экспертизе выполняет от начала до конца один химик-токсиколог. В случае качественного обнаружения яда проводят затем количественное определение, желательно несколькими методами. Все выполняемые операции и реакции в хронологической последовательности тщательно заносят в рабочий журнал, а при количественном определении и расчеты.

Каждое полное исследование заканчивают составлением экспертизы или акта химико-токсикологического исследования по утвержденным формам, которые являются юридическим документом. В заключение указывают, обнаружены или не обнаружены ядовитые вещества и в каких концентрациях. На основании результатов исследований приводятся рекомендации по профилактике отравления животных.

Диагноз отравления ставят не специалисты лаборатории, а практический врач или же его ставят комиссионно с учетом всех имеющихся данных (анамнеза, симптомов отравления, результатов вскрытия и химико - токсикологических (бактериологических и гистологических) исследований, иногда биопробы на живых объектах).

Контрольные вопросы:

1 С чьем обязан, ознакомится химик-токсиколог перед началом исследования?

2 С чего начинают исследования и насколько частей делят присланный материал?

3 Кто ставит диагноз и на основании чего?

Тема: Методы извлечения ядовитых веществ из корма и патматериала

Цель занятия: Освоить основные методы извлечения ядовитых веществ из корма и патмптериала.

Основные методы извлечения ядов – экстракция жидкостями, изоляция минерализацией и отгонкой с водяным паром.

В зависимости от растворимости ядовитых веществ для экстракции используют воду, ацетон, хлороформ, н-гексан и другие органические растворители.

Минерализацию осуществляют: 1) серной кислотой и пергидролем, 2) с соляной кислотой и калия хлоратом, а также методом сухого озоления.

Для минерализации серной кислотой и пергидролем берут 20-25 г. пат.материала в колбу Кьельдаля на 500 мл., заливают 10-12,5 мл. пергидроля, тщательно смешивают и добавляют 6-7 мл. концентрированной серной кислоты. После ослабления бурной реакции содержимое колбы осторожно подогревают на газовой горелке или электроплите периодически добавляем по 1-2 мл. пергидроля до тех пор, пока она не станет прозрачной, и не будет темнеть при дальнейшем нагревании.

В полученном минерализате можно экспресс-методом обнаружить ртуть, медь, цинк и мышьяк.

Для минерализации соляной кислотой и калия хлоратом (бертолетовой солью) берут 20-25 гр. патматериала в колбу Кьельдаля, заливают соляной кислотой, подогревают и добавляют не большими порциями калия хлорат до тех пор, пока жидкость не станет прозрачной. В минерализате экспресс-методом можно обнаружить свинец и барий.

Отгонку с водяным паром применяют для извлечения синильной кислоты, формальдегида, фенола, некоторых ХОС, ФОС и других веществ.

Перегонный аппарат состоит из парообразователя (круглодонная колба со стеклянной трубкой в пробке), отгонной колбы с двумя трубками в пробке (одна идет почти со дна от парообразователя, другая – короткая соединена с холодильником), водяного холодильника и приемной колбы.

Навеску измельченного материала помещают в отгонную колбу, подкисляют виннокаменной или щавелевой кислотой и подключают кипящий парообразователь, после чего начинают подогревать отгонную колбу. Дистиллят собирают в приемную колбу. В первых его порциях можно определять синильную кислоту, в последующих – другие вещества.

Для количественного определения берут точную навеску материала и отгонку продолжают до тех пор, пока перестанет проявляться специфическая качественная реакция на ядовитое вещество. Полученный дистиллят объединяют, замеряют его объем и количественно определяют содержание вещества.

Контрольные вопросы:

1 Какие основные методы извлечения ядовитых веществ Вы знаете?

2 Какие можно обнаружить вещества в минерализате экспресс-методом?

3 Для извлечения каких веществ применяют отгонку с водяным паром?

Тема: Экспресс методы обнаружения токсичных металлов и мышьяка. Обнаружения цинка, меди, ртути

Цель занятия: Освоить методы качественного определения минеральных ядов.

Материальное обеспечение:

1 Пробы корма, зерна с содержанием минеральных ядов, содержимое желудка, зоба, рвотные массы.

2 Набор необходимых приборов, реактивов и посуды.

Подготовка материала для исследования. Прежде чем проводить качественный анализ материала на металлические яды (ртуть, медь) необходимо его подвергнуть разрушению или минерализации.

Это связано с тем, что тяжелые металлы и мышьяк с белками животного происхождения образуют прочные комплексы типа альбуминатов. Разрушение можно осуществить сухим путем, простым сжиганием (сухое озоление) или же окислением различными реагентами в присутствии кислот (мокрое озоление).

Для исследования на ртуть и медь разрушение проводят концентрированной серной кислотой и пергидролем.

20-25 г патматериала или корма помещают в колбу къельдаля объёмом 250-300 мл, заливают 10-12,5 мл пергидроля, 1-2 мин перемешивают и прибавляют 6-7 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое колбы разогревается и наступает бурная реакция. Когда реакция затихнет, колбу осторожно, с соблюдением техники безопасности нагревают на электроплите и прибавляют 1-2 мл пергидроля до тех пор, пока содержимое колбы сделается прозрачным. При этом способе полного разрушения органического материала не происходит – остаются не разрушенными жир и продукты распада белков. Для разрушения 20-25 г материала требуется примерно 25-40 мин.

Обнаружение мышьяка

1 Метод Реинша. 10-20 г содержимого желудка (сычуга, измельченные кусочки печени, почки) или корма в колбе смешивают с 30-50 мл 15-18%-ной соляной кислоты. Сюда же помещают 2-4 свежеочищенные медные пластинки проволоки. Колбу нагревают на кипящей водяной бане в течении 30 минут.

При наличии мышьяка пластинки покрываются серо-черным налетом мышьяковой меди. Затем медные пластинки вынимают, промывают водой, спиртом, эфиром, высушивают между листками фильтровальной бумаги и помещают на дно узкой стеклянной пробирки нагревают. Перед нагреванием пробирку обертывают мокрой фильтровальной бумагой на 1-2 см выше медной пластинки и нагревают в наклонном положении.

При наличии мышьяка на холодных стенках трубки образуется белый налет при исследовании которого под микроскопом наблюдают характерные для мышьяка кристаллы, имеющие 4-8-ную форму с алмазным блеском.

2 Метод Гутцейта. Метод основан на способности мышьяковистого водорода с серебра нитратом давать соединение, окрашенное в желтый цвет.

В колбочку ёмкостью в 100 мл помещает 0,5 испытуемого препарата или 5-10 г пат. Материала. Заливают 10-15 мл 80%-ного раствора серной кислоты, добавляют 1-2 гранулы цинка без мышьяка, в отверстие колбочки вставляют свинцовую вату и сверху накрывают фильтровальной бумагой, на которую кладут 2-3 кристаллика серебра нитрита.

При наличии мышьяка, серебра нитрат окрашивается вначале в желтый, а затем в черный цвет. Подобную реакцию могут давать сурьмянистый фосфористый и сернистый водород.

Обнаружение цинка

1 Часть минерализата 1-2 мл разбавляют (1:1) дистиллированной водой, после чего берут 2-3 капли и нейтрализуют 25%-ным концентрированным раствором аммиаком (по лакмусу). Одну каплю этого раствора наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную ранее насыщенным раствором тиомочевины. После выдерживания в течение одной минуты над отверстием банки с 25%-ным раствором аммиака бумагу высушивают на воздухе и опрыскивают из пульверизатора раствором дитизона в бензоле (5 мл дитизона растворяют в 10 мл бензола). При наличии цинка на бумаге появляется пятно красно - малинового цвета.

В контрольном опыте вместо минерализата берут дистиллированную воду и проделывают все операции основного опыта. Пятно на бумаге не должно окрашиваться, так как присутствующий при этих условиях цинк не выявляется.

2 К нескольким каплям нейтрального или слабокислого раствора, содержащего цинк, добавляют несколько капель сероводородной воды. При наличии цинка появляется белая муть. Осадок цинка сульфида растворяется при добавлении соляной кислоты и вновь выпадает при добавлении натрия ацетата. Открываемый минимум цинка 1,5 кг.

3 Каплю раствора смешивают с каплей разведенного раствора ферроцианида калия, в присутствии цинка появляется белый осадок или муть, растворяющаяся в гидроокиси.

4 Каплю раствора смешивают с каплей разбавленного раствора кобальта нитрата. В жидкость опускают кусочек фильтровальной бумаги, который затем сжигают, зола в присутствии цинка окрашивается в зеленый цвет. Открываемый минимум цинка 0,05 кг.

Обнаружение меди

1 2-3 капли минерализата нейтрализуют концентрированным аммиаком, после чего каплю этого раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной раствором кремнекислого натрия и высушенной, держат над горлом склянки с аммиаком, подсушивают и опрыскивают из пульверизатора раствором рубеановодородной кислоты. В присутствии меди пятно окрашивается в темно-зеленый цвет.

В случае сомнительной реакции на медь с целью повышения чувствительности метода берут 3-5 мл минерализата и выпаривают в фарфоровой или кварцевой чашке на электроплитке с добавлением нескольких капель пергидроля для обесцвечивания темнеющей жидкости и ставят реакцию как описано выше.

2 Небольшое количество фильтрата помещают в две фарфоровые чашки. В одну из них прибавляют аммиак в избытке и сравнивают с фильтратом в другой чашке. Если в фильтрате содержится медь, он окрашивается в синий цвет.

3 В другую чашку прибавляют уксусную кислоту до слабокислой реакции, затем по каплям 5%-ный раствор калия фероцианида (желтой кровяной соли). Если есть медь, появляется красно-бурый осадок или красное окрашивание, вследствие образования коллоидного ферроцианида меди.

4 К исследуемому раствору по каплям добавляют 2-1 мл пиридинроданового реактива для получения осадка или мути, затем 1 мл хлороформа. В присутствии меди хлороформа окрашивается в изумрудно-зеленый цвет. Пиридиндродановый реактив готовят смешиванием 50%-ного раствора пиридина в воде 20% раствора аммония роданида в разных объёмах.

Обнаружение ртути

1 На беззольную фильтровальную бумагу наносят каплю взвеси меди иодида 5,3 г калия йодида растворяют в 10-15 мл воды), добавляют 40 мл 10%-ного раствора меди сульфата; образованный осадок фильтруют, промывают до полного обесцвечивания и смывают водой в мерную колбу. Через 2-3 мин на то же место наносят каплю минерализата. При наличии ртути появляется красное или красно-оранжевое пятно. Реакция высокочувствительная, позволяет обнаружить 0,25 мкг ртути в одной капле.

2 На очищенную пластинку наносят 2-3 капли исследуемого раствора. Образование серого пятно, переходящего в серебристо-блестящий цвет при растирании фильтровальной бумаги, указывает на присутствие ртути. Чувствительность 0,05 мг при предельной концентрации 10.

3 Каплю раствора смешивают с несколькими каплями 5-10%-ного раствора олова хлорида в концентрированной соляной кислоте. Получается белый осадок каломели, сереющей от выделения металлической ртути.

Контрольные вопросы:

1 Как проводят обнаружение мышьяка?

2 Как проводят обнаружение цинка?

3 Как проводят обнаружение меди?

4 Как проводят обнаружение ртути?

Тема: Экспресс методы обнаружения токсичных металлов и мышьяка. Обнаружения бария, свинца, мышьяка по Зингеру-Блеку

Цель занятия: Освоить методы качественного определения минеральных ядов

Материальное обеспечение:

1 Пробы корма, зерна с содержанием минеральных ядов, содержимое желудка, зоба, рвотные массы.

2 Набор необходимых приборов, реактивов и посуды.

Подготовка материала для исследования. Прежде чем проводить качественный анализ материала на металлические яды (ртуть, медь, барий) необходимо его подвергнуть разрушению или минерализации.

Это связано с тем, что тяжелые металлы и мышьяк с белками животного происхождения образуют прочные комплексы типа альбуминатов. Разрушение можно осуществить сухим путем, простым сжиганием (сухое озоление) или же окислением различными реагентами в присутствии кислот (мокрое озоление).

Для исследования на барий разрушение патматериала и кормов проводят концентрированной соляной кислотой и калия хлоратом (бертолетовой солью), чтобы избежать образования труднорастворимых сернокислых солей бария, выпадающих в осадок.

Навеску, материала в 20-25 г помещают в колбу къельдаля, заливают концентрированной соляной кислотой, нагревают и прибавляют небольшими порциями калия хлорат, пока жидкость

Не станет прозрачной. Разрушение материала происходит в течении 30-40 мин.

Обнаружение мышьяка по Зингеру - Блеку

Метод Зангер-Блека. Метод основан на восстановлении соединений мышьяка до мышьяковистого водорода, который дает с бумажкой, обработанной ртути дихлоридом, окрашивание в зависимости от количества мышьяка от жёлтого до тёмно-коричневого.

Для этого в редукционную колбу прибора Зангер-Блека вносят 2 г гранулированного цинка, не содержащего мышьяка, 5-10 мг олова хлорида, исследуемый фильтрат, 40-50 мл разведенный 1:7 серной кислоты и быстро оставляют заранее подготовленную насадку, в шарообразное отверстие, которой закладывают свинцовой ватой. В верхнюю часть насадки помещают кусочек фильтровальной бумаги пропитанной 5% раствором ртути бромида или ртути дихлорида.

Прибор оставляют на 1 час. При наличии мышьяка бром ртутная бумага окрашивается в жёлтый или темно-коричневый цвет. Сравнивая со стандартной шкалой определяет количество мышьяка в исследуемой пробе, перевода на 1 кг корма или пат.материала.

Обнаружение свинца

Каплю горячего нейтрализованного минерализата наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной 4%-ным раствором натрия тартрата, при наличии свинца появляется пятно от красно-оранжевого до фиолетового, не исчезающее после нанесения капли 10%-ного раствора натрия сульфата.

Обнаружение бария

3-5 капель минерализата нейтрализуют концентрированным аммиаком, одну каплю жидкости наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанную 4%-ным раствором виннокислого натрия, подсушивают на воздухе опрыскивают из пульверизатора раствором натрия родизоната, а затем буферным раствором с рН-2,8 ( 1,52 мл раствора натрия гидрофосфата и до 1 л воды) смешивают с 8,42 мл раствора лимонной кислоты.

В наличии бария появляется оранжево-красное пятно, которое исчезает после нанесения капли 10%-ного раствора натрия сульфата.

Контрольные вопросы:

1 Как проводят обнаружение мышьяка по Зингеру-Блеку?

2 Как проводят обнаружение свинца и бария?

Тема: Тонкослойная хроматография (экстракция, очистка экстрактов, концентрирование экстрактов)

Цель занятия: Изучить основные этапы тонкослойной хроматографии.

В основе метода лежит разделение ядовитых веществ (хроматография), выполняемое на слое адсорбента, который нанесен на подложку (стеклянную пластинку). Это один из простых, достаточно чувствительных и доступных для практических лабораторий методов. К тому же он не требует дорогостоящих, сложных приборов и дает возможность производить качественное и количественное определение многих пестицидов, ядов растительного и микробного происхождения.

Основные этапы тонкослойной хроматографии включают экстракцию (извлечение) ядовитых веществ из корма и патматериала, очистку экстрактов от посторонних примесей, концентрирование их, разделение на пластинке, проявление и количественное определение.

Экстракция – это процесс переноса растворенного вещества из одной жидкой фазы в другую (несмешивающуюся с ней). В качестве экстрагирующего растворителя берут обычно органические вещества, в которых хорошо растворяется яд. Например, для экстракции ХОС используют ацетон, н-гексан, петролейный эфир, бензол, хлороформ или их смеси; для ФОС – спирты, хлороформ, этилацетат.

Берут навеску измельченного объекта заливают растворителем и проводят экстракцию в аппарате Соксклета, при помощи смесителей, в шуттель-аппарате или путем простого настаивания в течение 12-14 ч.

Очистку экстрактов проводят методом омыления, сульфинирования, распределения между двумя несмешивающимися жидкостями, осаждения жиров, восков и белков, колоночной хроматографии. Точность исследования зависит от правильно подобранного в каждом конкретном случае метода очистки экстрактов.

Омыление применяют при определении устойчивых к щелочному гидролизу препаратов. Например, нельзя омылять ГХЦГ, ДДТ, производные мочевины, некоторые ФОС.

Сульфинирование осуществляется в делительной воронке, где н-гексановый экстракт осторожно встряхивают с концентрированной серной кислотой или насыщенным раствором безводного сульфата натрия в концентрированной серной кислоте. Органический слой обрабатывают до тех пор пока раствор сульфата натрия в серной кислоте не будет бесцветным.

Метод распределения между двумя несмешивающимися жидкостями основан на различии коэффициентов распределения ядовитых веществ и сопутствующих веществ между двумя несмешивающимися растворителями. С этой целью обычно берут н-гексан и диметилформамид или ацетонитрил.

Осаждение жиров и восков основано на плохой их растворимости в холодном ацетоне, для чего экстракт вымораживают в холодильнике или в приготовленных охлажденных смесях со льда и различных солей (хлорида натрия, сульфата и карбоната натрия, нитрата аммония и натрия).

Осаждение белков осуществляют коагулирующей смесью, состоящей из 5 г аммония, 10 мл 85%-ного раствора ортофосфорной кислоты и до 1 л дистиллированной воды.

Колоночная хроматография проводится при помощи стеклянных колонок, заполненных силикагелем или диоксидом кремния.

Концентрирование экстрактов осуществляют при помощи вакуум-ротационного испарителя, испарение с капилляром под вакуумом на водяной бане. Самые низкие потери препаратов бывают при использовании ротационного испарителя. В остальных случаях необходимо руководствоваться требованием: не повышать температуру водяной бани свыше 40⁰С и не упаривать досуха очищенные экстракты.

Разделение ядовитых веществ, содержащихся в концентрированном экстракте, проводят на пластинках с тонким слоем сорбента в хроматографических камерах с подвижным растворителем.

С этой целью можно использовать готовые пластинки отечественного и зарубежного производства.

Стеклянные пластинки размером 9 Х 12, 13 Х 18, 20 Х20 см тщательно моют раствором кальцинированной соды, затем хромовой смесью, водопроводной и дистиллированной водой, сушат в вертикальном положении. Перед нанесением сорбционного слоя обрабатывают спиртом и эфиром

Сорбционную массу готовят из силикагеля или окиси алюминия, которые закрепляют на пластинках крахмалом или гипсом.

Подготовка силикагеля. Очищенный от примесей силикагель м заливают на 18-20 ч разведенной (1:1) соляной кислотой, после сливания которой силикагель промывают водой и кипятят 2-3 ч в разбавленной (1:1) азотной кислоте. После промывания водопроводной, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции силикагель сушат при 130 ⁰ С в течении 4-6 ч., дробят на шаровой мельнице, просеивают через сито 100 меш (1600 отверстий на 1см² ) и хранят в склянке с притертой пробкой.

Подготовка гипса. Гипс (Ca SO_{4 .} 2Н₂ О) прокаливают в сушильном шкафу при 160⁰ в течении 6 ч, растирают в ступке и просеивают через сито 100 меш.

Приготовление сорбционной массы:

1 Силикагель с крахмалом. На 15 пластинок (9Х12 см) берут 40 г силикагеля марки ШСК или КСК-2, 1 г растворимого крахмала и 125 мл воды; 40 г силикагеля марки КСС-3, 1,5 крахмала и 110 мл воды. Крахмал заваривают в 15 мл воды, доливают остальную воду, засыпают силикагель и хорошо перемешивают.

2 Силикагель с гипсом. На 10 пластинок (9Х12 см) 35 г силикагеля КСК и 2 г гипса растирают в фарфоровой ступке, прибавляют 90 мл воды и размешивают до однородной массы.

3 Оксид алюминия с гипсом. На 10 пластинок (9Х12 см) 50 г оксида алюминия, просеянного через сито 100 меш, и 5 г гипса тщательно смешивают в фарфоровой ступке, переносят в колбу, добавляют 75 мл воды и встряхивают до образования однородной массы.

Для получения слоя сорбента стандартной толщины используют специальные приборы или берут две чайные ложки сорбционной массы, наносят на пластинку (9Х12 см) и покачиванием равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат при комнатной температуре и хранят в эксикаторе.

В качестве хроматографических камер используют стеклянные сосуды с плотно закрывающейся крышкой или эксикаторы, на дно которых наливают подобранный для каждого ядовитого вещества подвижный растворитель (например, для разделения ХОС берут н-гексан, петролейный эфир, бензол, гептан и их смеси; для ФОС – хлороформ, гексан, ацетон и их смеси).

Для обнаружения пятен ядовитых веществ на хроматограммах готовят проявляющие реактивы, которые образуют с ними цветные комплексы. Обычно пластинки опрыскивают раствором реагента при помощи стеклянного пульвизатора.

Ход анализа. На стартовую линию пластинки (1,5 см от края) наносят в виде точек анализируемые пробы и известные количества стандартных растворов предполагаемых ядовитых веществ при помощи шприца на 1 мл, микропипетки или специального микрометрического шприца. Размер пятна на слое сорбента в диаметре не должен превышать 1 см.

За 1 ч до анализа в хроматографическую камеру заливают подвижный растворитель, уровень которого не должен превышать 0,5 см. помещают пластинки в растворитель и закрывают плотно камеру. После поднятия растворителя по сорбенту на высоту 10 см пластинки вынимают, отмечают верхнюю границу подъема растворителя (линию фронта), высушивают на воздухе и обрабатывают проявляющим реагентом.

Качественная идентификация ядовитых веществ проводится по величине Rf (отношение расстояния от линия стандарта до центра пятна к расстоянию от линии стандарта до линии фронта), которая для каждого яда постоянна. Количественный анализ основан на измерении площадей пятен исследуемого вещества и известного количества стандартного вещества.

Контрольные вопросы:

1 Как проводят разделения ядовитых веществ?

2 Основные этапы тонкослойной хроматографии?

Тема: Обнаружение и определение химических веществ изолируемых

специальными методами

Цель занятия: Освоить методы качественного анализа и количественного определения фторидов и кремнефторидов, соединений бария, фосфида, цинка.

Материальное обеспечение: Пробы корма, воды, содержимое желудка кролика, предварительно отравленного фосфидом цинка, необходимый набор реактивов и посуды.