Подсчет количества микроорганизмов в посевах воздуха.
После термостатирования все выросшие колонии считают и определяют загрязненность воздуха по формуле. Описывают наиболее характерную колонию, делают мазок, красят по Грамму, микроскопируют и по совокупности признаков определяют к какому порядку относится исследуемая бактерия. В посевах воздуха всегда присутствуют колонии плесневых грибов. Описывают их , исследуют колонии в чашках Петри при малом увеличении х8, определяют к какому ролу принадлежит данная бактерия. Все препараты зарисовывают.
Произвести количественный учет бактерий в почве при помощи агаровых пластинок, описать бактерии по культуральным и морфологическим признакам.
Приготовление почвенной болтушки для посева микроорганизмов.
Взвешивают 1 г. исследуемой почвы на технических весах, и разводят последовательно в 100, 1000, 10000, 100000 раз в стерильной воде для получения почвенной болтушки при разведении 1:100000.
Разведение производят так: 1 г. почвы вносят в 99 мл. стерильной жидкости в колбе и размешивают в течении 3 мин. После отстаивания почвенной болтушки в течении 1- 1,5 мин стерильной пипеткой берут 1 мл почвенной болтушки при разведении 1 : 100 и вносят 9 мл. стерильной воды в пробирку №1. После размешивания и отстаивания почвенной болтушки (1 мин. размешивания и 0,5 мин. отстаивания) берут 1 мл. ее при разведении 1 : 1000 и вносят в пробирку № 2 (c9 мл. стерильной воды). Далее 1 мл. почвенной болтушки при разведении 1: 10000 вносят с пробирку № 3 (с 9 мл. стерильной воды) и получают почвенную болтушку, при разведении 1:100000. Пипетку меняют при каждой новой концентрации почвенной болтушки.
Подсчет количества микроорганизмов в почве.
Количество микроорганизмов определяют подсчетом развившихся колоний в чашках Петри. Берут среднее арифметическое (3 чашки) с учетом разведения. Подсчет производится без снятия крышки с чашки Петри. При большом количестве колоний на чашку Петри накладывают кружок фильтровальной бумаги с вырезанным радиально сектором и, передвигая его на крышке, делая соответственные пометки на стекле, производят подсчет колоний. Чем больше колоний, тем меньше площадь сектора.
Например: колоний в чашках Петри №1, 2 и 3 соответственно 80, 120 и 100. Следовательно, количество аэробных микроорганизмов в 1 г. исследуемой почвы:
Описание колоний и микроскопия
Вследствие микроскопической величины и простоты внешней формы определение бактерий производится не по одному, а по многим морфологическим признакам, а также культуральным и физиологическим. Описанию этих признаков бактерий придается важное значение в микробиологии.
Культуральными называют такие признаки, которые бактерии проявляют при выращивании их на чистых культурах на различных питательных средах. К ним относится: характер pocтa, тип колоний, способность к разжижению желатина и т.д.
Для ознакомления с методикой студентам рекомендуется описать 2-3 колонии бактерий по следующим культурным признакам: форма колонии, цвет, блеск, края колонии, центр, поверхность колонии. Практически поступают так: в чашках Петри с посевом выбирают различные колонии (по цвету, форме, консистенции) отмечают их цветным восковым карандашом снизу и описывают в форме текста диагноза бактерий.
Затем переходят к описанию морфологических признаков, из которых обычно отмечается форма бактериальной клетки, способность к движению, характер жгутования, способность к спорообразованию, окраска по Грамму. Для этого берут немного бактериальной массы из ранее описанной колонии, проводя петлей от края колонии к центру, на предметном стекле в капле воды готовят временный прижизненный препарат для микроскопирования. Имеете с учетом бактерий можно произвести и учет почвенных грибов - дрожжевых и плесневых. Для посева грибов можно использовать сусло-агар. Сусло-агар приготавливают заранее, следующим образом: к свежему заводскому суслу разведенному водой в 2,5 раза добавляют 2 % агара. подкисляют лимонной кислотой до слабокислой реакции по лакмусу, разливают в пробирки и стерилизуют в автоклаве. Посев грибов можно производить параллельно с посевом бактерий при разведении почвы 1 г. в 1000 или 10000 раз той же пипеткой, которой переносят почвенную болтушку из пробирки №1 в пробирку № 2 (1: 1000) или же из пробирки № 2 в пробирку № 3, но только после того как будет сделано соответствующее разведение. Посев производится в 3 чашки Петри, так же как и для бактерий. Инкубацию посева следует вести при температуре 22 - 25 0С в течении 5 суток. Подсчет колоний и определение количества грибов в 1 г почвы проводят так же, как и при учете бактерий. При описания посева желательно определять, кроме семейства еще и род грибов.