Подготовка мембранных фильтров к анализу

Мембранные фильтры проверяют на наличие дефектов и опускают в стакан с дистилированной водой, нагревают до температуры 50-60° С, промывают несколько раз для удаления растворителей и татем кипятят в свежей порции дистиллированной воды (20-30 мин. для стерилизации). Кипячение должно быть стойким, спокойным, иначе фильтры скручиваются и становятся непригодными к работе.

Для фильтрации применяют фильтр Зейтца. Рабочую часть фильтра стерилизуют кипячением. При фильтрации на стерильную сетку аппарата Зейтца накладывают кусочек фильтровальной бумаги, смоченной стерильной водой, а затем стерильный мембранный ультрафильтр. При анализе водопроводной воды через фильтр пропускают не менее 300-500 мл. воды При анализе сильно загрязненной воды из естественных водоемов пробу следует развести стерильной водой с таким расчетом, чтобы на фильтре вырастало не более 50 колоний бактерий Coli. По окончании фильтрации профламбированным пинцетом фильтр помещают в чашку Петри на застывшую среду Эндо так, чтобы между фильтром и поверхностью среды не осталось пузырьков воздуха. Чашки с посевами помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 37⁰ С. При определении бактерии Coli в воде из колодцев и открытых источников сапрфиты могут подавлять рост этой бактерии, поэтому рекомендуется проращивать фильтры при температуре 41-43⁰ С. После термостaтирования на фильтрах появляются розово-красные колонии, рекомендуется учитывать: ярко-красные колонии с металлическим блеском Bakt. Coil, блестящие розовые Coli aerogenes, бесцветные с розовым или красным центром Coli citrovorum и прозрачные бесцветные колонии Pamcoli . Характерные для бактерии Coli колонии подсчитывают, пользуясь лупой, готовят из них мазки и окрашивают по Грамму. Отсутствие в мазках бесспоровых грамотрицательных палочек дает основание для отрицательного заключения. При наличии их, оставшуюся часть колоний пересевают на среды Гисса с глюкозой, мальтозой и маннитом. Выращивают 18-24 часа при температуре 42⁰С. Если бактерии разлагают эти углеводы с образованием кислоты (это определяют по изменению окраски среды) и газов, то присутствие бактерии Coli в пробе считается доказанным. Чтобы определить титр Coli, нужно разделить объем профильтрованной воды в мл. на число колоний, характерных для бактерии Coli, выросших на фильтре. По тиру Coli легко рассчитать индекс (количество бактерий в 1 л. воды).

2. Подсчет количества микроорганизмов в водопроводной воде.

После термостатирования чашки Петри с посевами воды, ее просматривают, считают все выросшие колонии на приборе для подсчета колоний. Можно поступить и так: донышко чашки Петри по стеклу делят на секторы, их количество произвольно зависит от числа колоний в чашке - чем больше колоний, тем больше наносят секторов. Далее последовательно просчитывают все колонии в каждом секторе. Сумма их всех и дает микробное число воды. Одну из наиболее характерных колоний описывают по культуральным и физиологическим признакам, берут из нее мазок, красят но Грамму, микроскопируют и зарисовывают. Описывают морфологические признаки бактерий.

По совокупности признаков определяют хотя бы порядок, к которому принадлежит исследуемая бактерия.