
- •17 Определение электрокинетического потенциала клеток методом микроэлектрофореза.
- •Практикум
- •Задача № 4 определение электрокинетического потенциала клеток методом микроэлектрофореза.
- •1. Некоторые сведения из коллоидной химии.
- •Вынимать камеру из установки, для промывания и других действий можно только к крайних случаях, лучше всего согласовать с преподавателем!
- •Настроить правильно освещение микроскопа.
- •Произвести градуировку окулярной шкалы или сетки.
- •Напряжение подано на камеру и отсчитывается время только при нажатой кнопке пуск. Когда кнопка отпущена таймер остановлен, напряжения на камере нет.
- •Выбор числа делений отсчета и рабочего напряжения - заранее!
- •Цена деления окулярной сетки меняется всякий раз при смене объектива микроскопа!
- •Из удлинителей ничего вынимать не надо!
Цена деления окулярной сетки меняется всякий раз при смене объектива микроскопа!
Градуировку окулярной сетки проводят с помощью ОБЪЕКТ-МИКРОМЕТРА, в данной задаче можно использовать вместо объект-микрометра сетку камеры Фукса-Розенталя.
Для градуировки, под объектив микроскопа помещают объект-микрометр и настраивают микроскоп на резкое изображения шкалы объект-микрометра. Цена БОЛЬШОГО деления объект микрометра написана на его корпусе. Обычно - это 0.01 мм. Определяют сколько делений сетки окуляра приходится на 1 большое деление объект микрометра, а затем рассчитывают по ф-ле:
,
где:
M - число делений объект микрометра (допустим 1)
А - цена деления объект-микрометра (чаще всего 10 -5м)
N - число делений окулярной сетки.
Разумеется, если нет целых совпадений, то лучше всего выбрать М и N максимально возможными. Чем длиннее отсчет, тем точнее результат!
ПРИЛОЖЕНИЕ 2.
НАСТРОЙКА ОСВЕЩЕНИЯ МИКРОСКОПА (КОНДЕНСОР ОИ-10)
Зачем это надо? - Чтобы хорошо все было видно.
Термины: ИРИСОВАЯ ДИАФРАГМА - диафрагма принадлежащая конденсору, ПОЛЕВАЯ ДИАФРАГМА - диафрагма принадлежащая осветителю.
Настройка.
1.Поднять конденсор до упора. Полевую диафрагму открыть, темнопольную диафрагму конденсора откинуть.
закрыть ирисовую диафрагму.
Из осветителя вынуть матовое стекло если оно там есть.
Привести изображение нити накала лампы осветителя в центр ирисовой диафрагмы - качая зеркало и меняя положение осветителя.
Добиться резкого изображения нити лампы на ирисовой диафрагме передвигая лампу осветителя, относительно коллектора осветителя.
Закрыть полевую диафрагму.
Настроить микроскоп на резкое изображение любого препарата и убрать препарат.
Перемещая конденсор по высоте добиться резкого изображения полевой диафрагмы в поле зрения микроскопа.
зеркалом (тонкая регулировка!) привести изображение полевой диафрагмы в центр поля зрения.
Открыть полевую диафрагму до выхода ее краев за пределы поля зрения.
ИРИСОВОЙ ДИАФРАГМОЙ МОЖНО РЕГУЛИРОВАТЬ КОНТРАСТНОСТЬ И РЕЗКОСТЬ ИЗОБРАЖЕНИЯ ПРЕПАРАТА (в небольших пределах). Полезно также варьировать яркость лампы (по вкусу).
Если необходимо работать в ТЕМНОМ ПОЛЕ (тени эритроцитов, тромбоциты) - поставить на место диафрагму темного поля.
ирисовую диафрагму открыть полностью.
Контрастность изображения регулировать перемещая конденсор по высоте.
ПРИЛОЖЕНИЕ 3.
КОНСТРУКТИВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ РАБОЧЕГО МЕСТА.
В качестве таймера использован модернизированный пересчетный прибор типа ПП-16. Крайний левый декатрон (синее свечение) отсчитывает десятые доли секунды, следующий секунды, затем десятки секунд, сотни секунд и т.д.
Пульт управления находится на передней панели лабораторного стола, прямо под микроскопом.
Переключатель полярности имеет три фиксированных положения, которые обозначены как: ВЫКЛ.,+ слева, +справа. Надписи соответствуют ситуациям: напряжение на камеру не подано, напряжение на камеру подано на левом электроде камеры ( со стороны камеры) + и т.д.
Кстати следует не забывать, что если в микроскопе клетки бегут слева-направо, то на самом деле они бегут справа-налево.
Правее переключателя находится ручка кнопки "ПУСК". Положение ВНИЗ - соответствует поданному на электроды напряжению и пуску таймера.
Отжатая ручка - в нейтральном, среднем положении - соответствует режиму останова таймера и отключению электродов от источника напряжения. Верхнее положение кнопки пуск - пустое (резервное).
Правее кнопки пуск находится кнопка "СБРОС" - кратковременное ее нажатие обнуляет все декады таймера.
ПРИЛОЖЕНИЕ 4.
ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КАМЕРЫ ПРАКТИКУМА ДЛЯ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Для использования камеры в научных исследованиях необходимо ее термостатировать. В качестве покровных стекол использовать только шлифованные, притирать их обязательно.
Необходимо также градуировать камеру с помощью набора эталонных суспензий, например, фирмы Opton (Германия).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
После окончания работы следует камеру промыть дистиллированной водой и вытереть марлевой салфеткой досуха. Необходимо также обесточить установку. Для этого:
Найти справа от стола на стене розетку, в которую вставлены две штепсельные вилки. Придерживая рукой розетку аккуратно вынуть вилки из розетки.
На лабораторном столе приборы подключены к сети через удлинители.