
- •14 Исследование динамики гемолиза методом турбидиметрии метод кислотных эритрограмм
- •Практикум
- •Задача № 3
- •Задание
- •Физические принципы турбидиметрии клеточных суспензий.
- •Обратите внимание на соответствие величин т и d:
- •3.Метод кислотных эритрограмм.
- •Кривая динамики гемолиза называется эритрограммой
- •4. Регистрация эритрограммы.
- •Для следующего измерения наружные поверхности граней кюветы должны быть чистыми и сухими. Протирать байковой салфеткой!
- •5. Обработка эритрограммы.
- •6. Оформление отчета.
6. Оформление отчета.
В отчет следует включить:
конкретную задачу исследования
описание методики
первичные эритрограммы (можно подклеить диаграммную ленту, при условии аккуратной обработки, на ней должны быть нанесены все необходимые отметки, каждую эритрограмму подклеивать отдельно, рулоном не подклеивать) в виде таблицы (по типу таблицы 1).
графики интегральной и дифференциальной эритрограмм по числу измерений (сколько кривых сняли), с указанием параметров перечисленных выше
сводные результаты в виде графиков или таблиц исходя из конкретной задачи исследования. пример: график зависимости средней резистетности эритроцитов от времени облучения клеток электростатическим полем напряженности 10кВ/м.
ПРИЛОЖЕНИЕ -1
МОЖНО ЛИ ИСПОЛЬЗОВАТЬ УСТАНОВКУ ПРАКТИКУМА В СЕРЬЕЗНЫХ ЦЕЛЯХ?
Экспериментальная установка практикума для регистрации гемолиза вполне может служить как научное оборудование.
Единственное требование, которое при этом необходимо выполнить термостатирование кюветы. В этом случае резко возрастет качество воспроизводимости кривых. В практикуме имеется все необходимое, чтобы проводить работу в условиях термостатирования.
ПРИЛОЖЕНИЕ-2
КАКОЙ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ СМЫСЛ ЭРИТРОГРАММЫ И КАКОЙ БИОЛОГИЧЕСКИЙ СМЫЛ?
Интегральная эритрограмма показывает динамику лизиса эритроцитов, по сути дела это КУММУЛЯТА распределения клеток в данной популяции по стойкости к примененному гемолитику. Иногда она имеет несколько точек перегиба (ступенек), что приводит к появлению нескольких локальных экстремумов на дифференциальной эритрограмме.
Дифференциальная эритрограмма представляет собой с одной стороны кривую изменения скорости гемолиза, а с другой стороны это кривая распределения клеток по стойкости к гемолитику (гистограмма).
При глубоком исследовании целесообразно помнить, что диф. эритрограмма отражает процесс эритропоэза в целом или ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ НЕРАВНОЗНАЧНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ в организме млекопитающего, со всеми вытекающими отсюда следствиями. Полная интерпретация эритрограммы возможна только посредством математического моделирования. Однако и та интерпретация, которую можно проделать с помощью простейших параметров (то есть найденных на учебном занятии) довольно информативна (см.приложение3).
ПРИЛОЖЕНИЕ-3
КАКОЙ ПРАКТИЧЕСКИЙ ВЫХОД ОТ ЭРИТРОГРАММ?
Метод цитолизограмм наиболее полезен в двух случаях: клинической лабораторной диагностике и экологических исследованиях.
Клинический аспект. (Ниже речь идет о дифференциальной эритрограммме)
Расширение эритрограммы вправо (с нормально расположенным максимумом и концом) вызывается увеличением числа молодых эритроцитов и указывает на наличие регенераторного процесса (острая постгеморагическая анаемия, макроцитарные анемии печеночного происхождения). Расширение и сдвиг конца эритрограммы вправо с появлением двух и более максимумов встречаются при пернициозных анемиях, лейкозах. Сдвиг эритрограммы и ее максимума влево указывает на появление эритроцитов с пониженной резистентностью и встречается при инфекционных заболеваниях и интоксикациях гемолитическими ядами, при апластических состояниях. Гемолитические анемии характеризуются низкими, расширенными вправо кривыми с несколькими максимумами. Для многих заболеваний вызванных внутриклеточных кровепаразитами характерна кривая с низким максимумом и сильнейшим расширением вправо (гемолиз может длиться более часа).
Особенно, эритрограммы как метод удобны при массовых обследованиях по типу диспансеризации, вследствие высокой технологичности методики и возможности серьезной стандартизации. Целесообразно использовать данный метод при радиологических и токсикологических обследованиях животных.
Экологический аспект.
В настоящее время, в связи с рядом запретов на использование животных в различных опытах, широкое распространение получают различные методы определения токсичности того или иного продукта на БИОЛОГИЧЕСКИХ МОДЕЛЯХ. Эритроциты и метод эритрограмм являются одной из самых распространенных моделей при определении цитотоксичности in vitro. Исследуемым веществом воздействуют на суспензию эритроцитов, затем "отмывают" суспензию от испытуемого агента и регистрируют эритрограмму обработанных клеток. Сравнивая результат с эритрограмой интактных эритроцитов (контроль) судят о цитотоксичности испытуемого агента. В литературе имеется множество сведений о совпадении данных по цитотоксичности тех или иных веществ и их токсичностью для целого организма. В случаях, когда для испытуемого агента первичной клеточной мишенью являются именно мембраны клеток, такие данные не вызывают сомнений.
1 Это то же самое, что и относительные единицы