Обратите внимание на соответствие величин т и d:
-LG(1)=0; -LG(0.1)=1; -LG(0.01)=2; -LG(0)
Рис.4. Шкала электроизмерительного прибора КФК2
Принцип автоматической непрерывной регистрации динамики турбидиметрического ослабления изучаемого образца или динамики его оптической плотности заключается в следующем.
Предварительно, в кювету помещают среду без объекта и настраивают чувствительность КФК на 100% пропускания. Названная настройка производится путем регулировки усиления усилителя с помощью трех регулировочных рукояток КФК2: регулировка чувствительности ступенчато - три варианта положения, для каждого светофильтра, грубая плавная регулировка, тонкая плавная регулировка. Все рукоятки расположены на передней панели КФК слева. Справа на передней панели рукоятка установки светофильтров. Затем в кювету помещают объект исследования. Стрелка электрического прибора КФК при этом установится на отметку соответствующую оптической плотности или турбидиметрическому ослаблению объекта.
ШКАЛЫ РЕГИСТРАТОРА (САМОПИСЦА) И ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ПРИБОРА КФК2 СОГЛАСОВАНЫ
0.9:1. 100% ПРОПУСКАНИЯ СООТВЕТСТВУЮТ 90% ОТКЛОНЕНИЮ РЕГИСТРАТОРА.
0% ПРОПУСКАНИЯ СООТВЕТСТВУЮТ 0%
ОТКЛОНЕНИЯ РЕГИСТРАТОРА. СООТНОШЕНИЕ ШКАЛ ЛИНЕЙНО!
Если далее будет происходить изменение турбидиметрического ослабления образца (объекта) то на диаграммной ленте будет регистрироваться соответствующая КРИВАЯ.
! ВНИМАНИЕ !
КРИВАЯ ДИНАМИКИ СВЕТОПРОПУСКАНИЯ, А НЕ ДИНАМИКИ ОПТИЧЕСКОЙ ПЛОТНОСТИ ИЛИ ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКОГО ОСЛАБЛЕНИЯ!
3.Метод кислотных эритрограмм.
Если в среде, где суспендированы эритроциты, создать достаточную концентрацию некоторых веществ - гемолитиков (их множество, но самый простой - уксусная кислота 0.05Н или соляная 0.01Н), то есть если капнуть кислоты, то для эритроцитов любых животных можно обнаружить явления:
При достаточной концентрации гемолитика 100% будут лизированы. Лизис сопровождается выходом гемоглобина в среду и называется гемолизом.
Полный (100%) гемолиз произойдет не сразу, а спустя некоторое время.
Гемолиз всех клеток произойдет не одновременно - то есть эритроциты, принадлежащие к одной капли крови, по разному устойчивы к гемолитику. Характер их распределения по стойкости к гемолитику отражает физиологическое состояние животного. Поэтому кривая динамики гемолиза - эритрограмма - имеет диагностического значение.
В связи с тем, что даже очень разбавленная суспензия эритроцитов (1:2000) обладает значительным светорассеянием, а гемолизированные эритроциты практически не рассеивают свет (коэффициент турбидиметрического ослабления в результате гемолиза падает более, чем в 20 раз), наиболее удобно регистрировать динамику гемолиза с помощью автоматического турбидиметра.
Кривая динамики гемолиза называется эритрограммой
4. Регистрация эритрограммы.
Подготовительный этап.
Включить все приборы и дать им прогреться 15 - 30 минут. Лентопротяжный механизм самопишущего потенциометра - тумблер "диаграмма" не включать.
установить нужный светофильтр.
Далее возможны два основных варианта: а) исходный образец концентрированная суспензия эритроцитов или даже цельная кровь (с антикоагулянтом); б) исходный образец разбавленная до рабочей концентрации суспензия клеток. В зависимости от варианта меняется порядок действий.
а) Налить в кювету КФК физиологический раствор до риски на одной из граней кюветы и установить кювету в кюветное отделение КФК.
- Установить блок механической мешалки как крышку кюветного отделения и включить мешалку.
- Регулировками чувствительности установить стрелку прибора на 100% пропускания.
- Включить лентопротяжный механизм самописца. Прописать на диаграммной ленте 1 - 2 см базовой линии -I соответствующей 100% пропускания (точнее дождаться, когда само пропишется).
- Через специальное отверстие в крышке кюветного отделения (рис.5) ввести в кювету 10 мкл суспензии эритроцитов: концентрация суспензии должна соответствовать концентрации эритроцитов в крови разбавленной в 5 раз, вместо суспензии эритроцитов можно сразу вносить кровь разбавленную в 5 раз - присутствием других форменных элементов и компонентов плазмы крови можно пренебречь - конечное разбавление в кювете составит около пяти тысяч раз. Каплю разбавленной крови лучше всего вводить кювету с помощью конического полиэтиленового наконечника от автоматического микродозатора, хорошо бы вместе с самим микродоза. - 10 тором (рис5).
Рис.5. Устройство кюветного отделения (рисунок выполнен не пропорционально).
1 - стенка кюветного отделения КФК
2 - оптическое окошко
3 - ход лучей
4 - конический наконечник микродозатора
5 - штуцер с направляющим отверстием
6 - пипетка
7 - провода мешалки
8 - двигатель мешалки
9 - кювета с образцом
-в течение 2 - 3 минут " прописать" на диаграммной ленте - базовую линию- II соответствующую начальной концентрации клеток - уровень соответствующий начальному турбидиметрическому ослаблению суспензии . Заодно, необходимо убедиться, что спонтанный гемолиз отсутствует - в этом случае записывается СТРОГО ВЕРТИКАЛЬНАЯ шумовая дорожка (рис.6).
- ДАЛЕЕ ПУНКТЫ а) И б) СОВПАДАЮТ.
б) - установить в кюветное отделение кювету с чистой средой и прописать базовую линию -I - уровень 100%
- заменить среду в кювете на суспензию эритроцитов и прописать на диаграммной ленте уровень начального Т. ослабления.
Измерение.
2. -Записать на диаграммной ленте начальные условия измерения (лучше всего фломастером): D o - начальную оптическую плотность, дату, гемолитик, скорость ленты и т.п.
3. - через отверстие в штуцере ввести в кювету гемолитик; если нет специального указания от преподавателя то 20 мкл 2н СН3СООН.
4. - отметить на диаграммной ленте момент ввода гемолитика.
5. - дождаться конца гемолиза и записать на ленте значение остаточной оптической плотности.
6. - выключить лентопротяжный механизм, мотор мешалки и переставить крышку кюветного отделения на края стенок сосуда для мытья мешалки: мешалку мыть в физ. растворе, в качестве сосуда для мытья удобен кристаллизатор и т.п. Вынуть кювету и также промыть 2-3 раза физ. раствором.