5. Принцип окраски по Граму.

1) на фиксированный мазок помещают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианфиолетовым, капают на бумагу дистиллированную воду и выдерживают 1-2 минуты ( по Сеневу)

2) Снимают бумажку, не промывая мазок водой, наливают на мазок раствор люголя и выдержиают 1 минуту.

3) сливают раствор люголя и, не промывая водой, капают на мазок спирт с йодом, 2 раза по 30 секунд, после чего промывают мазок водой.

4) докрашивают препарат фуксином Пфейффера 1-2 минуты, после чего вновь промывают водой. Высушить (можно с помощью фильтровальной бумаги)

Грам(+) окрашиваются в синий цвет(т.к. у них двойная стенка и краситель задерживается и фиксируется), грам(-) в красный (розовый)(генцианфиолетовый вымывается).

6. Принципы классификации бактерий. Понятие о виде. Культура. Штамм. Клон.

Принципы классификации изучает таксономия. Таксон- группа организмов, объединенная по определенным однородным свойствам в рамках той или иной таксономической категории. Выделяют царство, подцарство, отдел, класс, порядок, семейство, род, вид и подвид. Вид- совокупность особей, объединенных по близким свойствам, но отличающихся от других представителей рода, название вида соответствует бинарной номенклатуре: первое слово- род, второе-вид. На питательной среде, характеризуются сходными морфологическими, тинкториальными (тоношение к красителям), культуральными, биохимическими и антигенными свойствами( чистая культура). Чистая культура микроорганизмов, выделенных из определенного источника и отличающихся от других представителей вида, называется штамом. Клон- совокупность потомков, выращенных из единственной микробной клетки.

По классификации Берджи бактерии составляют царство прокариот и делятся на 4 отдела: грациликуты- с тонкой клеточной стенкой, грам(-); фирмикуты- с толстой клеточной стенкой, грам(+); тенерикуты- без ригидной клеточной стенки, включающие микоплазмы; мендозикуты- архебактерии с дефектной клеточной стенкой, с особенностями строения рибосом, мембран и рибосомных РНК.

7. Структура бактериальной клетки: оболочка, ядерная субстанция, цитоплазма, капсулы, споры, включения, жгутики, фимбрии.

1. Постоянные: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма с включениями, нуклеоид или ядро, рибосомы.

2. Непостоянные: капсулы, микрокапсулы, жгутики, слизь, фибрии и пили, споры.

Нуклеоид-эквивалент ядра у бактерий. Расположен в центральной зоне бактерий в виде двунитчатой ДНК, замкнутой в кольцо и плотно уложенной наподобие клубка. Ядро бактерий не имеет ядерной оболочки, ядрышка и основных белков. Обычно в бактериальной клетке содержится 1 хромосома, представленная замкнутой в кольцо молекулой ДНК. При нарушении деления в ней может находится 4 хромосомы и более.

Функции: хранение и передача генетической информации, реализация генетической информации в процессе жизнедеятельности клеток.

Метод выявления: микроскопический метод: окраска по Фельгену, Романовскому-Гимзе.

Рибосомы: рибо-нуклеопротеиновые частицы с константой70S.

Функции: белоксинтезирующая.

Выявление: микроскопический метод: окраска по Романовскому-Гимза.

Мезосомы: сложно закрученные структуры, производные цитоплазматической мембраны.

Функции: участие в делении, спорообразовании, синтезе клеточной стенки, в энергетическом метаболизме.

Выявление: электронная микроскопия.

Плазмиды: автономно уложенная кольцевая молекула ДНК.

Функции: хранение и передача наследственной генетической информации,сообщающие клетки дополнительные свойства, но не жизненно необходимые.

Выявление: электронная микроскопия.

Спора-своеобразная форма покоящихся фирмикутных бактерий, т.е. бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки. Споры образуются при неблагоприятных условиях сущесвования бактерий, сопровождающихся высушиванием, дефицитом пит.вещ-в. Образование спор способствует сохранению вида и не является способом размножения,как у грибов. Форма спор может быть овальной, шаровидной. Расположение в клетке терминальное-на конце палочки(возбудитель столбняка), ближе к концу (газовая гангрена) и центральное (сибиреязвенная бацилла).

Функции: сохранение бактерии как вида в неблагоприятных условиях.

Выявление: микроскопический метод: окраска по Ожешко.

Включения: продукты метаболизма накапливаются при избытке пит.вещ-в: полифосфаты(волютин), гранулеза, гликоген.

Функции: запасные пит.вещ-ва для пластического и энергетического обмена.

Выявление: микроскопический метод: окраска по Нейсеру, Леффлеру(зерна волютина).

Цитоплазматическая мембрана: является трёхслойной структурой и окружает наружную часть цитоплазмы бактерий. Состоит из двойного слоя липидов, главным образом фосфолипидов со встроенными поверхностными и интегральными белками.

Функции: отграничивает протопласт клетки, является осмотическим барьером, участвует в процессах транспорта пит.вещ-в и выведение метаболитов, участвует в синтезе компонентов клеточной стенки.

Выявление: электронная микроскопия.

Клеточная стенка- прочная,упругая структура, придающая бактерии определенную форму и сдерживающая высокое осмотическое давление в клетке. Основу составляет пептидогликан.

Функции: защитная функция, участвует в процессе деления клетки, поступление пит.вещ-в и выведение метаболитов, несет рецепторы к фагам

Выявление: окраска по Грамму (дифференцирует по грам + и грам - ).

Капсула: слизистое образование, прочно связанное с клеточной стенкой, имеющее четко очерченные внешние границы. Состоит из полисахаридов или полипептидов и липидов.

Функции: защитная(предохраняет от повреждения, высыхания), определяет антигенные св-ва бактерии(Vi-Аг, K-Аг),препятствует проникновению в клетку токсических вещ-в, фактор патогенности.

Выявление: окраска по Бури-Гинсу.

Жгутики бактерий определяют их подвижность. Представляют собой тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны, длина их больше, чем длина клетки. Толщина жгутиков 12-20 нм, длина- 3-12 мкм. Число жгутиков варьируется от одного (монотрих) у холерного вибриона до десятка и сотен жгутиков, отходящих поп периметру бактерии (перитрих), у кишечной палочки, протея. Лофотрихи имеют пучок жгутиков на одном из концов клетки, амфитрихи- по одному жгутику или пучку жгутиков на противоположных концах клетки. По хим.составу жгутики состоят из белка-флагеллина, обладающего антигенной специфичностью.

Функции: определяют целенаправленное движение бактерии, участвуют в прикреплении бактерий к субстрату, обеспечивает антигенные бактерии (Н-Аг)

Выявление: серебрение по Морозову, окраска по методу Леффлера, темнопольная микроскопия.

Фимбрии и пили: нитевидные образования, более тонкие и короткие, чем жгутики.

Фибрии отходят от поверхности клетки и состоят из белка, называемого пилином. Среди фимбрий разного типа выделяют фимбрии, ответственные за адгезию, т.е. прикрепление бактерий к поражаемой клетке, фимбрии, ответственные за питание, водно-солевой обмен, половые (F-пили), или конъюгационные, пили. Пили общего типа многочисленны и достигают нескольких сотен в одной клетке. Термин «пили» применяется чаще для обозначения особых фимбрий-половых пилей, образуемых так называемыми мужскими клетками-донорами, содержащими трансмиссивные плазмиды (F, R, Col); их количество 1-2 на клетку. Отличительной особенностью половых пилей является взаимодействие с особыми «мужскими» сферическими бактериофагами.

Выявление: электронная микроскопия.