Хід роботи

Одну з половинок листка Nicotiana glutinosa відмічають невеликим надрізом. Листки розміщують на невеликий лист цупкого картону. Поверхню листків посипати порошком карборунду, а на відмічену надрізом половинку листка нанести декілька крапель розчину інфекційної вірусної РНК (в двох концентраціях 5 та 10 мкг/мл). Розчин разом з порошком обережно розподіляють скляною паличкою по поверхні половинки листка. Часточки корборунда поранюють поверхню листа і сприяють проникненню РНК в клітини індикаторної рослини.

Другу половинку листка інокулюють таким же способом препаратом інтактного ВТМ (також з концентраціями РНК 5 та 10 мкг/мл) і швидко підсушують на повітрі. Таким чином заражують не меньше 10 листків. Листки черенками нанизують на нитку і поміщають у вологу камеру. Через 2-3 доби на інокульованих листках з’являються місцеві некрози. Підрахунок некрозів проводять на всіх половинках листків, визначають середнє арифметичне для кожного препарату і розраховують питому інфекційність.

Аналогічно визначають питому інфекційність реконструйованого препарату ВТМ та порівнюють з інфекційністю нативного ВТМ, взятого у той же концентрації.

Контрольні запитання

1. Що означає термін «питома інфекційність»?

2. Яким чином визначають питому інфекційність препарату нативного ВТМ, реконструйованої ВТМ і вільної РНК?

3. Від яких факторів залежить питома інфекційність?

4. Що таке «рослина-індикатор»?

5. Яким чином проводять зараження рослин-індикаторів?

Список рекомендованої літератури

Атабеков, И.Г. Специфичность взаимодействия белка с РНК при сборке ВТМ (Ni 2519). В кн. Сборка предбиологических и биологических структур [Текст] / И.Г. Атабеков, М.Э. Тальянский. – М.: Наука, 1982. – С. 206-212.

Бойко, П.Л. Основи екології та біофізики вірусів [Текст] / П.Л. Бойко. – К.: Фітосоціоцентр, 2007., 195 с.

Вирусология. Методы [Текст] / под ред. Б.М. Мейхи. – М.: Мир, 1988. –

344 с.

Костюк, П.Г. Біофізика [Текст] / П.Г. Костюк, В.Л. Зима, І.С. Магура, М.С. Мірошниченко, М.Ф. Шуба. К.: Обереги, 2001. 544 с.

Миронов, А.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине [Текст] / А.А. Миронов, Я.Ю. Комиссарчик, В.А. Миронов. – С-П.: Наука, 1994. – 398 с.

Поліщук, В.П. Посібник з практичних занять по курсу «Загальна вірусологія» [Текст] / В.П. Поліщук, І.Г. Будзанівська, Т.П. Шевченко. – К.: Фітосоціоцентр, 2005. – 204 с.

Практикум по общей вирусологии [Текст] / под ред. И.Г. Атабекова. – М.: Наука, 1981. – 165с.

Фрайфелдер, Д. Физическая биохимия [Текст] / Д. Фрайфелдер. – М.: Мир, 1980. - 582 с.

Шмараков, І.О. Основи вірусології. [Текст] / І.О. Шмараков, М.М. Марченко, М.Я. Співак – Чернівці: Чернівецький нац. ун-т, 2011. – 320 с.

Зміст

Лабораторна робота 1. Виділення очищенних препаратів вірусу тютюнової мозаїки та бактеріофагу Сд	3
Лабораторна робота 2. Визначення спектрів дійсного поглинання ВТМ і фага Сд. Поправка на розсіювання світла вірусної суспензії	8
Лабораторна робота 3. Реполімеризація білку ВТМ in vitro з утворенням вірусоподібних агрегатів	11
Лабораторна робота 4. Виділення рибонуклеїнової кислоти (РНК) ВТМ за допомогою додецилсульфата натрію (ДСН) і перхлорату	13
Лабораторна робота 5. Реконструкція часток ВТМ із РНК і білку in vitro вірусоподібних агрегатів	14
Лабораторна робота 6. Електронна мікроскопія	16
Лабораторна робота 7. Визначення питомої інфекційності препаратів нативного ВТМ, РНК ВТМ і вірусоподібних агрегатів, отриманих реконструкцією in vitro Список рекомендованої літератури	19 21