Вопрос 3.Культивирование ана- и аэробных организмов.

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

1-культивирование на поверхности плотных и жидких средах.МО выращивают на поверхности плот­ной среды или в тонком слое жидкой среды, и кислород поступает к ним непосредственно из воздуха. Важно увеличить площадь соприкосновения среды с воздухом. Среды наливают тонким слоем в посуду с широким дном — чашки Петри, колбы Виноградского. В жидких средах аэробные микроорганизмы часто растут, образуя на поверхности пленку. Факультативные анаэро­бы развиваются и в толще жидкой среды, вызывая ее помутнение.

2-глубинное культивирование в жидких средах-увеличению поверхности соприкоснов. питательной среды с О₂ воздуха. При глубинном культ-нии в жидких средах МО используют растворенный О₂. Вместе с тем обеспечивают постоянную аэрацию.

Наиболее широко распростр-ый способ глубинного культивирования — выращивание на качалках, обеспечивающих встряхивание или вращение колб или пробирок со скоростью 100—200 об/мин. Аэрировать культуру можно про­дуванием через толщу среды стерильно­го воздуха(кислород угнетает рост).

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

1-выращивание в высоком слое среды. Жидкую среду наливают в сосуды для культивирования высоким слоем. Так как нельзя стерилизовать среды, если они занимают бо­лее половины высоты сосуда, часть среды стерилизуют отдельно и стерильно доливают её в сосуд для культивирования сразу же после посева. Среду кипятят на бане 30—40 мин, затем быстро охлаждают, чтобы не успел раствориться кислород воздуха, и вносят на дно посевной материал.

2-Культивирование в вязких средах. Диффузия кислорода в жидкость уменьшается с увеличением ее вязкости. Поэтому в вязких средах, таких как картофельная или с кукурузной или другой мукой. Вязкость жидких сред легко увеличить, если добавить к ним 0,2—0,3% агара.

3-выращивание в толще плотной среды. Для получения изолированных колоний при выделении чис­тых культур или определении численности анаэробных микроор­ганизмов. Посевной материал вносят в расплавленную и остужен­ную до 48—50° агаризованную среду, перемешивают и оставляют в пробирках или трубках Бурри или чашки Петри. Поверхность среды в пробирках зали­вают парафином. При использовании чашек Петри для выращивания анаэробов засеянную агаризованную среду наливают в крышку чашки и, по­сле того как среда застынет, плотно прижимают к ее поверхно­сти дно чашки. Зазор между стенками дна и крышки, где среда соприкасается с воздухом, заливают стерильным парафином .

4-выращивание в анаэростатах-в вакуумных металлических камерах, снабженных манометром. Из анаэростата от­качивают воздух, а затем, как правило, заполняют его смесью азота (90—80%) и углекислоты (10—20%), до давления 500 мм рт. ст. Избыточное дав­ление исключает возможность диффузии кислорода воздуха.

Для культивирования анаэробов предложены специальные ка­меры и система ГазПак (GasPak), Н₂ и СО₂ в замкнутом пространстве и эффективно поглощающая О₂.

Для культивирования строгих анаэробов предложены специ­альные камеры, заполненные смесями 90%N₂, 5%С0₂ и 5%Н₂), которые содержат внутри все необходимое для выполнения МБ работ, включая термостат.

Билет №5