Вопрос 3. Методы диагностики вирусов

• выделение и идентификацию возбудителя;

• обнаружение и определение титров противовирусных AT;

• обнаружение Аг вирусов в образцах исследуемого материала;

• микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.

1)Культуры клеток для выявления вирусов

Вирусы размножаются только в живых клетках, и выделение возбудителя в заражённой культуре клеток — один из основных методов диагностики вирусных инфекций. Поскольку большинство патогенных вирусов отличает тканевая и типовая специфичность, то почти к каждому вирусу можно подобрать соответствующие клеточные или тканевые культуры, а также создать стандартные условия культивирования. Размножение вируса обеспечивают чувствительные клетки. Поэтому при выделении неизвестного возбудителя проводят одномоментное заражение 3~4 культур клеток, предполагая, что одна из них может оказаться чувствительной. Культуры клеток получают диспергированием соответствующих органов и тканей, но чаще используют эмбриональные ткани (человека и животных) либо трансформированные опухолевые клетки. Клеточные культуры обычно растут в виде монослоя.

Куриные эмбрионы — практически идеальные модели для культивирования некоторых вирусов (например, гриппа и кори). Замкнутая полость эмбриона препятствует проникновению микроорганизмов извне, а также развитию спонтанных вирусных инфекций. Заражение проводят на хорион-аллантоисную оболочку, в амниотическую или аллантоисную полость либо в желточный мешок.

2)по эффектам на животных моделях (повышение температуры тела, появление характерных клинических признаков, гибель и т.д.), куриных эмбрионах и на клетках (в культурах). Под воздействием конкретных вирусов возможно изменение морфологии, роста, репродукции клеток либо их разрушение. Факт размножения вирусов в чувствительных клетках in vitro определяют по цитопатическим эффектам:1)бляшкообразование,2) тельца включений,3) феномену гемадсорбции, «цветной реакции».

4)Появление гигантских многоядерных клеток и др;

3)Серологические методы диагностики:1)Торможение гемагглютинации(смешивают культуральную среду, содержащую возбудитель, с известной коммерческой антисывороткой и вносят в культуру клеток. После инкубации определяют способность культуры к гемагглютинации и при её отсутствии делают заключение о несоответствии вируса антисыворотке)2)Торможение цитопатического эффекта интерференцией вирусов.3)Прямая иммунофлюоресценция. 4)Иммуноэлектронная микроскопия.

Билет №25

Вопрос 1. Круговорот азота в биосфере

Центральное место в круговороте азота занимает аммоний. Он является продуктом разложения белков и а/к, попадающих вместе с остатками животного и растительного происхождения в почву. В хорошо аэрируемых почвах аммоний подвер­гается нитрификации; бактерии родов Nitrosomonas и Nitrobacter окисляют его до нитрита и нитрата. В качестве источника азота растения могут использовать аммоний и нитрат. В от­сутствие кислорода из нитрата образуется молекулярный азот (денитри­фикация). Бактерии, участвующие в этом процессе, используют при этом нитрат в качестве окислителя (акцептора водорода), т.е. «дышат» с помощью NO₃^- вместо 0₂; в этом случае говорят о «нитратном дыха­нии». Денитрификация ведет к потере азота почвой. Наряду с этим бак­терии способны и к фиксации молекулярного азота. Связывающие азот бактерии живут или свободно в почве, или в симбиозе с высшими растениями (симбиотические азотфиксаторы). Основную роль в круговороте азота наряду с животными и растениями играют бактерии. Фосфор и азот как факторы, лимитирующие продукцию биомассы. Элементами, которые ограничивают рост растений и тем самым про­дукцию биомассы, являются фосфор и азот. Они играют такую роль и на суше, и в океанах. На этот счет имеются точные данные для мор­ской воды. Отсюда следует, что про­дукцию биомассы в конечном счете лимитируют фосфаты. Таким обра­зом, в морской воде даже азотфиксирующие организмы цианобакте­рий не имеют селективного преимущества перед другими.