Вопрос 3. Хранение культур бактерий.Понятие «музейная культура»

Необходимым условием успешной работы с МО-правильное поддержание их с целью сохранения жизнеспособности клеток,таксономических, а также любых других, важных для исследователя свойств. Общего ме­тода, одинаково пригодного для хранения многочисленных и разнообразных групп МО, пока не существует. Поэ­тому в крупных коллекциях разные группы МОсо­храняются различными методами. Кроме того,чтобы исключить возможность потери мо,каждый штамм сохраняется несколькими способами.

Способы хранения МО:1)периодические пересевы на свежие пита­тельные среды,2) сохранение культур на питательной среде под ва­зелиновым маслом,3) хранение клеток в лиофилизированном со­стоянии.4)реже при низ­ких или сверхнизких температурах, в дистиллированной воде или 1%-ном растворе хлористого натрия, на адсорбентах в высушен­ном состоянии. Выбор метода хранения зависит от це­лей, для которых используются мо, а также от имеющегося в распоряжении исследователя оборудования.

1)Периодические пересевы на питательные среды.-это один из первых приемов длительного сохранения МО в лабор-ии,и сейчас ши­роко используется.Аэроб­ов пересевают чаще всего на поверхность ско­шенной агаризованной среды, микроаэрофилов-в полужидкую среду(0,2—0,3% агара),анаэробов-в толщу плот­ной среды или в жидкую среду. Культуры пересевают на свежие среды в 2 пробирки.Одну пробирку используют для работы,а вторую-для сохранения и пересева.

Частота пересева различных мо неодинакова и определяется их свойства­ми. Многие пересеваются один раз в 1—2 месяца,а молочнокислые бак­терии,нуждаются в более частых пересевах. Хранение культур в холодильнике при 4—6° позво­ляет увеличить время между пересевами.

ОДНАКО регулярные пересе­вымогут привести к утрате некоторых морфологических и физиологических признаков,снижению б/х активности культур, повышают опасность инфици­рования ее посторонними мо.Велика вероятность возникнове­ния спонтанных мутантов и их селекция.

2)Хранение под минеральным маслом.-широко используется для бактерий и микроскопичес­ких грибов.Метод обеспечивает довольно длительное сохра­нение жизнеспособности и стабильности таксономических и дру­гих признаков МО. Масло предотвращает высыхание среды, замедляет про­цессы метаболизма и позволяет увеличить время между пересе­вами,

МО выращивают на агаризованной питательной среде;аэробы-на поверх­ности скошенной(под углом 45°)среды, микроаэрофилы и фак.анаэробы-в полужидкой среде, анаэробы-в толще среды. После того как культуры хорошо разовьются, их заливают маслом. Как правило медицинское вазелиновое масло с плотностью 0,8—0,9.Масло стерилизуют 1 ч в автоклаве при 121° (1 атм), а затем для удаления влаги прогревают в течение 1 ч в сушильном шкафу при температуре не выше 150° или ос­тавляют на двое—трое суток при комнатной температуре. Куль­туры заливают маслом так, чтобы слой его не превышал 1 см над средой или верхним краем скошенной среды, и сохраняют при комнатной температуре либо в холодильнике при 4—6°.

Для пересева клетки из-под масла отбирают петлей и, удалив излишек масла проведением петли по стенке пробирки, перено­сят на свежую питательную среду.

3)Хранение в лиофилизированном состоянии.Лиофилизация-процесс высушивания под вакуумом замороженных клеток. Лиофильно-высушенные клетки сохраняют в ампулах, запаянных под вакуумом. Применение этого метода позволяет в течение 10—20 и более лет сохранить без заметных изменений жизнеспособность, морфологические, культуральные, физиологические свойства, а также биохимическую активность клеток.

Для реактивации к лиофилизированным клеткам добавляют по каплям стерильную дистиллированную или водопроводную воду в количестве 0,5—1,0 мл. После регидратации клетки высевают на богатые питательные среды.

Лиофилизацию широко применяют для длительного хранения различных микроорганизмов. Тем не менее этот метод нельзя считать универсальным.К лиофилизации более устойчивы Гр+. 4)Хранение при низких и сверхнизких температурах. Хранение микроорганизмов в замороженном состоянии при низких и сверх­низких температурах по сравнению с другими методами характе­ризуется наибольшей универсальностью. Однако этот метод тре­бует специального оборудования и большой осторожности в рабо­те с жидким азотом, поэтому используется лишь для сохранения микроорганизмов, не выдерживающих лиофилизацию.

Клетки замораживают при разных температурах (от-10 до -196°) и различных скоростях замораживания. Для защиты от повреждающего действия низких температур используют криопротекторов.(10—20%-ный раствор глицерина)