1Морфологические признаки

2Тинкториальность(способность окрашиваться разными красителями)

3Культуральные свойства:

Форма колонии

Размер в мм

Профиль

Блеск и прозрачность

Цвет

Край колонии

Структура

консистенция

Вопрос 2.Условия культивирования микроорганизмов.

Для роста микроорганизмов существенное значение имеют не только состав питательной среды, но и такие факторы, как кис­лотность среды, аэрация, температура, свет, влажность. Развитие микроорганизмов возможно лишь в определенных пределах каж­дого фактора, причем для различных групп микроорганизмов эти пределы часто неодинаковы.

Активная кислотность среды

Активная кислотность (рН) среды имеет решающее значение для роста многих микроорганизмов. Большинство бактерий лучше всего растут при рН, близком к 7,0, напротив, микроскопические грибы предпочитают слабокислые среды. Поэтому в приготовлен­ных средах всегда следует определить значение рН. Измеряют рН электрометрическим методом на потенциометре. В лаборатор­ной практике удобно использовать различные жидкие или бумаж­ные индикаторы (см. Приложение). Широко применяется, напри­мер, жидкий двухцветный индикатор, бромтимоловый сииий (бромтимолблау). Его цвет изменяется от желтого к синему при сдвиге рН от 6,0 до 7,6. При рН 7,3 индикатор имеет сине-зеленую окраску. Используют также универсальный индикатор, который изменяет окраску в интервале рН от 2 до 10.

В случае необходимости рН сред доводят до нужного значения растворами кислот (НС1, Н₂50₄), щелочей (ЫаОН, КОН) или со­лей, имеющих щелочную реакцию (№₂СОз, N311003). Для кор­ректировки рН целесообразно иметь растворы разной концентра­ции. Значение рН сред может измениться в процессе стерилизации, поэтому после стерилизации его следует проверить и довести до нужного, если это требуется, стерильными растворами кислоты или щелочи.

Активная кислотность питательной среды, благоприятная для начала роста микроорганизмов, часто меняется в процессе куль­тивирования микроорганизмов. Эти изменения могут быть резуль­татом образования продуктов метаболизма или неравномерного потребления отдельных компонентов среды. Например, при сбра­живании углеводов в среде накапливаются органические кислоты, снижающие рН среды. В средах с КЬЮз рН возрастает, как уже отмечалось, благодаря более интенсивному потреблению нитрат-иона и накоплению ионов калия.

Чтобы не допустить чрезмерного изменения рН в культурах микроорганизмов и удержать его на необходимом уровне, исполь­зуют различные приемы. Иногда в среды добавляют буферные растворы. В микробиологической практике чаще других применяют фосфатные буферы. Однако если рост мик­роорганизмов сопровождается образованием большого количества кислот, то тех количеств буферного раствора, которые можно до­бавлять к средам (не более 5 г фосфатов на 1 л среды), оказыва­ется недостаточно, так как противодействие любого буфера изме­нению рН не беспредельно. Поэтому для микроорганизмов, актив­но изменяющих кислотность среды, применение буферов, неэф­фективно. При культивировании таких микроорганизмов в среды вводят избыточное количество мела, который нейтрализует обра­зующиеся кислоты. Можно нейтрализовать образующиеся кисло­ты по ходу развития культуры 10%-ным стерильным раствором ЫаНСОз.

Поддержание определенного значения рН во время роста осо­бенно важно для тех микроорганизмов, которые образуют в про­цессе жизнедеятельности кислоты, но не обладают устойчивостью к ним. К их числу относятся молочнокислые бактерии, а также мно­гие псевдомонады. Большие затруднения встречаются, когда нуж­но поддерживать рН в слабощелочных средах, так как для диапа­зона рН от 7,2 до 8,5 подходящих буферов не существует. Поэтому иногда приходится периодически или непрерывно доводить рН до нужной величины, добавляя стерильно в среду растворы кислоты или щелочи при постоянном контроле значения рН. В современ­ных ферментерах это достигается с помощью специальных авто­матических устройств.

Аэрация

Кислород входит в состав воды и многих соединений, поэтому поступает в клетки всегда в больших количествах. Однако значи­тельная часть микроорганизмов нуждается в постоянном притоке молекулярного кислорода. Такие микроорганизмы принято объ­единять в группу облигатных аэробов. Энергетическим процессом, у них является аэробное дыхание, а молекулярный кислород игра­ет роль терминального окислителя. Среди облигатных аэробов вы­деляют группу микроаэрофильных микроорганизмов, которые нуждаются в кислороде, но лучше растут при парциальном давле­нии Ог« меньшем, чем в воздухе. Развитие других микроорганизмов, напротив, возможно только в отсутствие кислорода. Получение энергии у этих микроорганизмов не связано с использованием молекулярного кислорода. Для многих из них кислород токси­чен — он угнетает рост или вызывает гибель клеток. Такие мик­роорганизмы называют облигатными анаэробами. Среди микроор­ганизмов выделяют также группу факультативных анаэробов, представители которой способны расти как в присутствии, так и в отсутствие молекулярного кислорода. Например, некоторые дрож­жи иди энтеробактерии в зависимости от наличия кислорода осу­ществляют аэробное дыхание или брожение.