Вопрос 3. Метод предельных разведений.

Определение количества клеток высевом в жидкие среды (ме­тод предельных разведений). Метод используют для подсчета мик­роорганизмов, которые плохо или совсем не растут на плотных питательных средах. В пробирки с жидкой средой вносят строго измеренный объем из различных разведений исследуемого суб­страта. После инкубации, исходя из числа пробирок, в которых наблюдался или отсутствовал рост, рассчитывают по табл. 11 наиболее вероятное число клеток, содержащихся в 1 мл исследуе­мого субстрата. Таким образом, определение количества микроор­ганизмов методом предельных разведений включает приготовле­ние разведений, посев в жидкую среду, регистрацию наличия или отсутствия роста после инкубации и расчет наиболее вероятного числа клеток в единице объема исходного субстрата.

Приготовление разведений. Разведения исходной суспензии готовят, как и для чашечного метода.

Посев в среду и регистрация результатов. Сте­рильную среду, обеспечивающую рост микроорганизмов, числен­ность которых хотят определить, предварительно разливают в пробирки (колбы) и стерилизуют. В пробирки (колбы) следует наливать одинаковый объем среды. Посев проводят из каждого разведения или из 4—5 последних, причем каждое разведение вы­севают в 3—5 параллельных пробирок. Количество посевного ма­териала везде одинаково и, как правило, составляет 1 мл. Засеянные пробирки помещают в термостат. Время инкубации колеблет­ся от 2 до 15 суток и зависит от скорости роста микроорганизмов, численность которых определяют. После инкубации регистрируют рост микроорганизмов, используя различные показатели: помут­нение среды, образование пленки, осадка, газа или накопление в среде определенных продуктов метаболизма.

Наиболее вероятное количество клеток в единице объема рас­считывают по таблице Мак-Креди, разработанной на основании методов вариационной статистики. Для этого первона­чально составляют числовую характеристику, которая включает три цифры. Первая цифра слева показывает число пробирок в том последнем разведении, при высеве из которого во всех засеянных пробирках был отмечен рост. Две следующие цифры обозначают число пробирок, в которых отмечен рост микроорганизмов при засеве их из двух последующих разведений. Затем по таблице на­ходят наиболее вероятное число микроорганизмов, соответствую­щее данному значению числовой характеристики. Количество микроорганизмов в 1 мл (1 г) исходного субстрата соответствует этому числу, умноженному на то разведение, которое было взято для получения первой цифры числовой характеристики.

Билет №10

Вопрос 1. Второй и третий этап развития микробиологии как науки II этап-этап открытия мира микроскопов.1610-Галилео Галилей изобрел микроскопическую трубу. Далее братья Захариус и Ханс Янсены изобрели микроскоп,однако микробов в него не наблюдали. А уже с Левенгука начинается история открытия мира микробов, что дало мощный толчок для развития микробиологии. Микроскоп имел 160кратное увеличение. В этот период господствовало мнение о самопроизвольном зарождении инфекционного начала.Франческо Реди первым опроверг самозарождение червей. Сторонником был Сполонссане(1769) ( все микроорганизмы зарождаются от себе подобных). Положил начало методам стерилизации(кипячение и герметичность).Тереховский предложил «учение об анималькулях»Появилось два направления в описании морфологии МО. 1-мономорфизм(Возглавил Ф. Конн). Все МО сохраняют постоянство формы и признаков и св-в. 2-полиморфизм(Карл Негель)- все МО в зависимости от условий способны к изменчивости.Утверждение,что болезни вызваны теме же МО,но измененными.

Сер.19 века-поворотный этап в развитии микробиологии.

Пастер в Париже, Кох в Берлине создали мировые центры изучения микробиологии.