Вопрос 3. Посев на плотные питательные среды,назначение этих сред.

Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Способы приготовления пита­тельных сред и стерилизации подробно описаны ниже.Посев(инокуляцией)-внесение МО в стерильную среду.Посев МО требует соб­людения определенных правил, которые необходимо выполнять, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посто­ронними микроорганизмами. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название МО и дату посева. Надпись делают чернилами по стеклу или на наклеенной этикетке.

МО для посева берут бактериологической петлей или иглой, если микроорганизмы выращены на плотной среде. Бактериологические пет­ли и иглы делают, используя тонкую проволоку из вольфрама или нихрома, которую закрепляют в металлическом или стеклянном держателе. Диаметр петли — 4—5 мм.

Петлю (иглу) стерилизуют в пламени,чтобы не повредить МО, петлю (иглу) охлаждают, прикасаясь ею к внутренней по­верхности сосуда или к питательной среде, свободной от клеток микроорганизмов.

Отбор мо с плотной среды: Пробирку с куль­турой берут в левую руку,чтобы поверх­ность питательной среды с налетом МО была обращена кверху. Пробирку держат в горизонтально или наклонно. В правую руку берут петлю,как карандаш, и прокаливают в пламени. Затем мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижимают ватную пробку к ладони, вынимают ее из пробирки и держат. Края открытой пробирки с культурой МО обжигают в пламени и вводят в пробирку петлю.Мик­робную массу с поверхности субстрата. Горлышко пробир­ки обжигают в пламени, затем обжигают ватную пробку и закрывают ею пробирку. Если конец ватной пробки загорится, то не следует бросать пробку. Ее нужно быстро ввести в пробирку, где вата сама потухнет.

Если пересевают на ско­шенную агаризованную среду, то петлю вводят в пробирку до конца и, слегка касаясь ею поверхности агара, проводят снизу вверх либо зигзагооб­разную, либо прямую черту-штрих.

Отбор с жидкой среды:пипетку за верхний конец вынимают из бумаги или пенала,и вводят в пробирку или колбу с культурой. Отбирать жидкую культуру пипеткой можно с помощью резиновой груши.

Рассев из жидкой на плотную среды в чашке Петри:Расплавленную на кипящей бане среду, содержащую агар или желатину, разливают в стерильные чашки Петри. Со­суд со средой в правую руку, вынимают пробку, за­жимая ее мизинцем и безымянным левой руки,обжига­ют горло сосуда в пламени горелки и, приоткрыв большим и сред­ним пальцами левой руки крышку чашки Петри,быстро налива­ют в чашку расплавленную среду в таком количестве,чтобы дно чашки было полностью покрыто. Крышку тотчас зак­рывают и чашку оставляют на горизонтальной поверхности до тех пор, пока не застынет среда. Для посева приоткрывают крышку чашки Петри и на поверхность плотной среды наносят каплю или «петлю» жидкой культуры, которую осторожно распределяют стек­лянным стерильным шпателем (шпатель Дригальского) либо пет­лей.Все описанные манипуляции следует проводить около пламе­ни.

Назначение 1)выделение чистых культур.2)изучение морфологии колонии(форма,размер,поверхность,цвет,блеск и проч).3)диагностические исследования.4)хранение МО.5)количественный учет.

Билет №9