1.8 Основные положения выносимые на защиту:

• распространение акушерско-гинекологических заболеваний у коров в Северо-Восточном регионе Нечернозёмной зоны РФ и их воспроизводительная способность при разных системах содержания;

• характеристика сократительной активности миометрия больных эндометритом коров;

• разработка способов терапии и профилактики воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров с использованием озонированных: рыбьего жира, растительного рафинированного масла и изотонического раствора хлорида натрия.

2 Материал и методы исследований

Работа выполнялась в период с 1990 по 2003 годы и являлась составной частью научных исследований по теме: «Усовершенствовать и разработать методы и средства диагностики, профилактики и лечения незаразных болезней сельскохозяйственных животных» с номером гос. регистрации 01.200.2-01263. Клинико-экспериментальные исследования проводили на животноводческих комплексах Кировской, Пермской, Нижегородской и Вологодской областей. Под наблюдением находились 10281 разновозрастных коровы холмогорской и голштинизированной чёрно-пёстрой пород с продуктивностью от 3,9 до 8,2 тысячи килограмм молока при жирности от 3,4 до 4,1 процента.

Изучение вопроса о степени распространения акушерско-гинеко-логических заболеваний у коров проводили согласно “Методическим указаниям по диагностике, лечению, профилактике акушерско-гинекологи-ческих болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров”(1986).

В цельной крови гемоглобин определяли по Сали, эритроциты и лейкоциты подсчитывали в счетной камере Горяева, выводили лейкограмму. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с использованием латекс-теста по С.Г.Потаповой и др. (1977), индекс регидности или коэффициент деформируемости эритроцитов вычисляли на приборе «Измеритель деформируемости эритроцитов автоматический ИДА-1». В сыворотке крови определяли общий белок рефрактометрическим методом, белковые фракции - нефелометрическим методом по Оллу и Маккорду, в модификации С.А.Карпюка (1962), бактерицидную активность по О.В.Смирновой, Т.А.Кузьминой (1966), лизоцимную активность по В.Г.Дорофейчуку (1968), иммуноглобулины классов A, G и M методом радиальной иммунодиффузии по G.A. Mancini в модификации Б.Е.Караваева (1983) с использованием моноспецифических антисывороток крупного рогатого скота, общие иммуноглобулины с применением NaSО₄ (б/в, х.ч.), циркулирующие иммунные комплексы по П.В.Барановскому, В.С.Дальнишину (1983), активность β-лизинов по О.В.Бухарину и др. (1972). Оценку состояния процессов пероксидации проводили методом индуцированной биохемилюминесценции на биохемилюминометре БХЛ-06, сопряжённым с компьютером IBM PC/AT в диалоговом режиме. Билирубин, АЛТ и АСТ определяли спектрофотометрически, щелочную фосфатазу - методом по гидролизу п-нитрофенилфосфата, креатинин - методом Поппера, мочевину по цветной реакции с диацетилмонооксимом.

Изучение сократительной активности и хемореактивности миометрия коров проводили на 6-ти канальном «Миоцитографе» конструкции А.Г.Гусева и В.И.Циркина. В опытах использовали матки коров, находящихся в разных физиологических состояниях (нестельные, стельные с разным сроком гестации и больные гнойно-катаральным эндометритом). Было проведено 141 различное тестирование. Методика исследований состояла из оценки фоновой активности миометрия при перфузии только раствора Кребса, а затем изучали реакцию мышечных волокон на различные вещества, для этого полоски перфузировали веществом в минимальной его концентрации в течение 10 минут, далее отмывали раствором Кребса и вновь перфузировали этим же веществом, но в концентрации на порядок выше предыдущей. В конце эксперимента изучали эффект адреналина на фоне других БАВ, а также эффект применения обзидана и озонированного (в течение 30 минут с концентрацией озона на выходе прибора 10 мг/л) раствора Кребса. При анализе механограмм рассчитывали число сокращений на 10-ти минутном интервале, их среднюю величину (амплитуда СА, в мН), сумму амплитуд всех сокращений на 10-ти минутном интервале (суммарная СА, в мН/10 мин) и тонус (в мН). Вычисленные показатели выражали в процентах к фоновым значениям.

Отбор проб маточного содержимого от 118 коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, осуществляли по методике Н.Н.Михайлова с соавт.(1967). Чувствительность выделенных культур микроорганизмов к различным антибиотикам определяли в соответствии с “Методическими указаниями по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков” (1983).

Разработка методик озонотерапии и озонопрофилактики выполнена с использованием отечественного генератора медицинского озона «Озон-М-50» (МАЮИ 941714.004 ТУ) производства ОАО «Электромашиностроительный завод им. ЛЕПСЕ» г. Киров, рыбьего жира, изготовленного согласно ТУ 8112-04977536-1-93, и растительного рафинированного подсолнечного масла, изготовленного в соответствии с требованиями ТУ 9140-208-00334537-97.

Жирнокислотный состав рыбьего жира до и после озонирования изучали методом газожидкостной хроматографии.

Фармако-токсикологическую оценку озонированного рыбьего жира и озонированного растительного рафинированного масла осуществляли согласно нормативным документам: «Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения. РД 42-28-8-89», «Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов вводимых людям. Методические указания. Мук 4.1/4.2.588-96», «Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96».

Для определения величины антимикробной активности ОРЖ, ОРРМ и ОФР в качестве тест-культур использовали музейные штаммы Staphylococcus aureus 35, Pseudomonas aeruginosa 1677, Escherihia coli М-17 и микроорганизмы, выделенные из экссудата коров, больных эндометритом.

Механизм антимикробного действия озонированного рыбьего жира на культуры золотистого стафилококка и кишечной палочки изучали посредством электронной микроскопии.

Материалом для гистологического исследования являлись матки убойных клинически здоровых, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и выздоровевших коров после внутриматочных введений озонированного рыбьего жира. Парафиновые срезы толщиной 5 – 7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, азур-эозином, по ван Гизону, Граму, заключали в канадский бальзам и покрывали покровными стёклами.

С целью изучения терапевтической эффективности, ОРЖ больным острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом животным (n =37) вводили внутриматочно в дозе 50-75 мл. Коровам контрольной группы (n =37) с целью оказания лечебной помощи в полость матки инстиллировали 10%-ю суспензию трициллина на рыбьем жире в дозе 100,0 мл. Интервал введения препаратов составлял 48 - 72 часа.

Для определения терапевтической эффективности озонированного рыбьего жира в составе комплексного лечения при субклиническом эндометрите животных в контрольную (n=24) и подопытную (n=24) группы подбирали по принципу аналогов на основании положительной реакции их течковой слизи с 4%-ным раствором NaOН в период стадии возбуждения полового цикла. Терапию коров подопытной группы осуществляли с выполнением однократных инъекций 1%-го раствора новокаина в дозе 100,0 мл в блокаде по С.Г.Исаеву, 10,0 мл 10%-ной суспензии АСД - 2 на тривите интрамускулярно и внутриматочно вводили 10,0 мл озонированного рыбьего жира. Животным контрольной группы назначали лечение по идентичной схеме, за одним лишь исключением: им в полость матки инстиллировалось 10,0 мл 1%-ного раствора диоксидина пролонгированного.

Эффективность озонированного рыбьего жира при санации матки у бесплодных коров оценивали на двух группах животных – подопытной (n=16) и контрольной (n=16). Коровам подопытной группы через 6-8 часов после искусственного осеменения мано-цервикальным способом интраматочно вводили 10,0 мл озонированного рыбьего жира, а животным контрольной группы – 10,0 мл мастисана А.

Целесообразность использования озонированного рыбьего жира при профилактике послеродового эндометрита определялась на трёх группах коров. Животных первой опытной группы подразделили на две подопытные группы. Первую подгруппу (n=40) составили коровы с нормальным отелом, которым не позднее шести часов после отделения последа ОРЖ вводили в полость матки однократно в дозе 75 мл. Второй подгруппе животных (n=10) препарат назначали после оперативного отделения плодных оболочек. Коровам второй опытной группы изучаемый препарат в указанной выше дозировке инстиллировали внутриматочно двукратно с интервалом 72 часа как в случаях нормальных родов (n=38), так и патологических (n=12). Контрольных животных в зависимости от течения послеродовой деятельности разделили на две подгруппы и им трансцервикально однократно назначали пять фуразолидоновых суппозиториев.

При оценке терапевтической эффективности озонированного растительного рафинированного масла при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите коровам подопытной группы (n=25) ОРРМ вводили в полость матки с ректальной фиксацией её шейки в количестве 50-75 мл с интервалом 48-72 часа. Животным контрольной группы (n=25) интраматочно назначали 100,0 мл 10%-ой суспензии фуразолидона на растительном масле с интервалом 48-72 часа.

Инфракрасные (ИК) спектры образцов субстанций физиологического раствора изучали методом жидкой плёнки на спектрофотометре «Specord 75 IR» в диапазоне волновых чисел 4000-500 см^-1.

Оценку растворимости озона в 1000,0 мл физиологического раствора и динамику его распада осуществляли йодометрическим методом по ГОСТ № 030941 в модификации О.Ю.Искусных, М.И.Рецкого (2002).

Оценку сердечной деятельности у коров после парентеральных введений озонированного физиологического раствора проводили по М.П.Рощевскому (1965).

Изучение эффективности сочетанного применения ОФР с окситоцином для профилактики субинволюции матки и послеродового эндометрита провели на коровах с нормальным отёлом. Озонированный 0,9%-ный раствор хлорида натрия животным первой (n=26) группы вводили путем струйного внутривенного вливания в объеме 1000,0 мл в день отела, на 1-й, 3-й и 5-й дни послеродового периода совместно с 20 ЕД окситоцина. Концентрация озона в инфузионной среде была в среднем 2,5 мг/л. Коровам второй (n=26) группы по той же схеме и в том же количестве интравенозно назначали стерильный изотонический раствор хлорида натрия, в который предварительно добавляли 20 ЕД окситоцина.

Определение эффективности озонотерапии в составе комплексной схемы лечения коров, больных острым эндометритом, развившегося после нормального отёла, на фоне субинволюции матки и задержания последа провели на 114 животных. Заболевших коров по принципу парных аналогов разделили на две группы – подопытную и контрольную. В день постановки диагноза на заболевание животным обеих групп внутримышечно назначали 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола и 10,0 мл тривита. Инъекцию витаминов повторяли через 10 суток. Коровам подопытной группы на 3,5 и 7-ой дни болезни внутривенно струйно инфузировали 1000,0 мл ОФР (О₃ – 2,0-2,5 мг) совместно с 20 ЕД окситоцина. Интраматочно по способу глубокого цервикального введения с ректальной фиксацией шейки матки с обязательной аппликацией слизистой оболочки цервикального канала с интервалом 48 часов в объеме 50-75 мл вводили ОРЖ. Комплексная схема лечения коров контрольной группы отличалась тем, что им интравенозно назначали 400,0 мл 20% -го раствора глюкозы и 20 ЕД окситоцина, а в полость матки – 100,0 мл 10%-ной суспензии трициллина на рыбьем жире.

Для определения эффективности озонотерапии при одновременном заболевании коров цервицитом и острым эндометритом их по принципу парных аналогов разделили на подопытную и контрольную группы. В день постановки диагноза на заболевание животным обеих групп внутримышечно назначали 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола, 10,0 мл тривита и подкожно 20,0 мл ПДЭ. Инъекцию витаминов и ПДЭ повторяли через 10 суток. Коровам подопытной группы на 3, 5 и 7-ой дни болезни внутривенно струйно инфузировали 1000,0 мл ОФР совместно с 20 ЕД окситоцина. Интраматочно с обязательной аппликацией слизистой оболочки цервикального канала с интервалом 48 часов в количестве 75,0 мл вводили ОРЖ. Комплексная схема лечения коров контрольной группы отличалась тем, что в идентичные сроки им интравенозно назначали 400,0 мл 20%-го раствора глюкозы совместно с 20 ЕД окситоцина, а в полость матки – 100,0 мл 10%-ной суспензии трициллина на рыбьем жире.

Сравнительную терапевтическую эффективность сочетанного применения ОФР и озонированного растительного рафинированного масла при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите определяли на 38 коровах. При этом в день постановки диагноза животным внутримышечно назначали 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола и 10,0 мл тривита. Инъекцию витаминов повторяли через 10 суток. Коровам подопытной (n=19) группы на 3, 5 и 7-й дни болезни внутривенно струйно инфузировали 1000,0 мл ОФР (О₃ – 2,0-2,5 мг) совместно с 20 ЕД окситоцина. Интраматочно при ректальной фиксации шейки матки с интервалом 48 часов в объеме 50-75 мл вводили ОРРМ. Комплексная схема лечения коров контрольной (n=19) группы отличалась тем, что интравенозно им на 3, 5 и 7-й дни курса терапии назначали 400,0 мл 20%-ного раствора глюкозы совместно с 20 ЕД окситоцина, а в полость матки – 100,0 мл 10%-ной суспензии трициллина на растительном масле.

Эффективность сочетанного применения ОФР и озонированного рыбьего жира оценивали в лечении 36 коров, больных хроническим катарально-гнойным эндометритом. Животным трёхкратно с интервалом 48 часов вводили 1%-ный раствор новокаина в дозе 100,0 мл по методу С.Г. Исаева, однократно в день постановки диагноза интрамаскулярно 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола и двукратно с интервалом в семь дней внутримышечно по 10,0 мл 10%-ной суспензии АСД-2 на тетравите. Внутриматочно подопытным (n=18) больным коровам дополнительно вводили посредством полистироловой пипетки в зависимости от размеров матки 15-20 мл озонированного рыбьего жира двукратно с интервалом 24-48 часов и внутривенно ОФР с концентрацией озона 2-2,5 мг в объёме 1000,0 мл трёхкратно с интервалом 48 часов, а контрольным (n = 18) животным – 15-20 мл 1%-ного раствора диоксидина пролонгированного действия и внутривенно трёхкратно с интервалом 48 часов 200,0 мл 40%-ного раствора глюкозы.

Регистрацию сократительной функции матки у коров осуществляли методом внутренней гистерографии с помощью разработанного нами устройства.

Исчисление экономической эффективности озонотерапии проводили согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» М., 1997. Статистическая обработка материала выполнена на персональном компьютере IBM “Pentium IV” в операционной системе “Windows-2000” с помощью пакета программ “Microsoft Office 2000”.