17.Приготовление темного поля по Архангельскому

Темное поле

Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольнои микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами.

Основная особенность темнопольных конденсоров заключается в том, что центральная часть у них затемнена и прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. Объект освещается косыми боковыми лучами и в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные частицами, находящимися в препарате. Темнопольная микроскопия основана на эффекте Тиндаля, известным примером которого служит обнаружение пылинок в воздухе при освещении их узким лучом солнечного света.

Чтобы в объектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура объектива должна быть меньше, чем апертура конденсора. Для уменьшения апертуры в обычный объектив помещают диафрагму или пользуются специальными объективами, снабженными ирисовой диафрагмой.

При темнопольной микроскопии микроорганизмы выглядят ярко светящимися на черном фоне. При этом способе микроскопии могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. Однако темнопольная микроскопия позволяет увидеть только контуры объекта, но не дает возможности изучить внутреннюю структуру. С помощью темнопольнои микроскопии изучают препараты типа раздавленная "капля". Предметные стекла должны быть не толще 1,1-1,2 мм, покровные 0,17 мм, без царапин и загрязнений.

Лептоспира в темном поле (микрофотография)

При приготовлении препарата следует избегать наличия пузырьков и крупных частиц (эти дефекты будут видны ярко святящимися и не позволят наблюдать препарат). Для темнопольной применяют более мощные осветители и максимальный накал лампы.

Настройка темнопольного освещения в основном заключается в следующем:

1) устанавливают свет по Келеру; 2) заменяют светлопольный конденсор темнопольным;  3) на верхнюю линзу конденсора наносят иммерсионное масло или дистиллированную воду;  4) поднимают конденсор до соприкосновения с нижней поверхностью предметного стекла;  5) объектив малого увеличения фокусируют на препарат;  6) с помощью центрировочных винтов переводят в центр поля зрения светлое пятно (иногда имеющее затемненный центральный участок);  7) поднимая и опуская конденсор, добиваются исчезновения затемненного центрального участка и получения равномерно освещенного светлого пятна.

Если этого сделать не удается, то надо проверить толщину предметного стекла (обычно такое явление наблюдается при использовании слишком толстых предметных стекол - конус света фокусируется в толще стекла).

После правильной настройки света устанавливают объектив нужного увеличения и исследуют препарат.

18.Биопсия кожи

Гистологическое исследование является наиболее ценным методом диагностики в дерматологии, а при некоторых заболеваниях (опухоли кожи, болезнь Дарье, ретикулез, глубокий микоз и др.) - решающим. Несмотря на это, гистологическая картина, чаще всего, только подтверждает клинический диагноз, то есть на основании морфологических изменений можно поставить только предварительный диагноз. Поэтому направление материала на гистологическое исследование патологоанатому должно сопровождаться детальным описанием клиники заболевания, а при необходимости - включать также данные дифференциальной диагностики.

В некоторых случаях биопсию кожи делают для контроля эффективности лечения.

На практике используют разные методы биопсии (иссечение скальпелем, пункция, электроэксцизия), но наиболее часто - иссечение, при котором повреждение ткани минимальное. Пункционный метод нельзя считать оптимальным, поскольку при нем возможно проникновение инфекции, кровотечение, ускорение роста ткани (активизация процесса при опухолях). При иссечении ткани электрохирургическими инструментами сравнительно большая часть материала подвергается коагуляции и делается непригодной для исследования.

Самым надежным способом является эксцизионная биопсия. Большинство авторов рекомендует проводить иссечение в границах пораженной и нормальной кожи. Исследователи единодушны в том, что биопсированный участок должен включать подкожную основу. Материал целесообразно брать из нескольких участков пораженной кожи.

Биопсию следует считать маленьким операционным вмешательством и потому - проводить в условиях тщательной стерильности и анестезии.

Инструментами для биопсии служат скальпель, ножницы, щадящие конхотомы; необходимы также хирургическая игла, шовный материал. Для остановки кровотечения можно использовать электрохирургические наконечники, концентрированный раствор цинка хлорида или карболовую кислоту. Прежде чем взять кусочек ткани, необходимо очистить его от корок, чешуек, струпьев. После обработки операционного поля спиртом, эфиром или спиртовым раствором йода, иссекают участок пораженной кожи вместе с участком нормальной, проводят гемостаз и накладывают 2-3 шва. Биоптат помещают в обычный или специальный фиксатор (жидкость Флеминга: однопроцентной хромовой кислоты - 1 часть, двухпроцентной осмиевой кислоты - 4 части и ледяной уксусной кислоты - 15 частей; жидкость Шабо: этилового спирта восьмидесятипроцентного - 60 мл, фенола - 15 г, раствора формальдегида - 5 мл, кислоты уксусной - 2 мл). Полученный материал можно сохранять до 4 месяцев. При меланобластоме или подозрении на малигнизацию невуса биопсию проводят в онкологических учреждениях. При этом опухоль удаляют, с захватыванием здоровой кожи в границах 3-4 см, а не иссекают только ее саму, ради избежания диссеминации новообразования.

При лепре биопсию делают под местной анестезией после соответствующей обработки кожи. Иссекают периферическую часть подозрительного на лепру элемента вместе с верхним слоем подкожной основы, после чего на рану накладывают шов. Биопсированный материал фиксируют нейтральным раствором формальдегида, жидкостью Флеминга или Шабо. При невозможности исследовать материал на месте, его направляют в отделение патоморфологии вышестоящего учреждения.