Перечень и назначение питательных сред, использующихся в схеме анализа нестерильных лекарственных средств

Название и номер среды по схеме	Назначение, особенность компонентного состава	Учитываемый признак, его проявление
Среда № 1	Количественное определение бактерий (МАФАМ).	Макроморфология и подсчет числа колоний.
Среда № 2	Определение количества грибов и дрожжей.	Макроморфология и подсчет числа колоний.
Накопительная среда № 3	Среда создает условия для преимущественного роста Г" палочек (при этом рост Г* бактерий подавлен внесенным в среду малахитовым зеленым).	Изменение цвета среды, признаки бактериального роста.
Дифференциал ьно- диагностическа я Среда № 4 (Эндо)	Идентификация бактерий семейства Enterobacteriaceae, Escherichia coli.	Способность ферментировать лактозу, появление красных (бледно-розовых) колоний с металлическим блеском (без блеска); рост микроорганизмов сопровождается изменением цвета среды в ярко-малиновый.
Дифференциал ьно- диагностическа я среда № 5 (висмутсульфит агар)	Идентификация бактерий Enterobacteriaceae, Salmonella spp.	Черные (коричневые) колонии.
Накопительная среда № 8	Накопление Pseudomonas spp., Staphylococcus aureus.	Изменение цвета среды, признаки бактериального роста.
Дифференциал ьно- диагностическа я среда № 9 (с глицерином)	Выявление пигмента пиоцианина у Pseudomonas aeruginosa.	Изменение цвета среды с серовато-желтоватого на голубовато-зеленоватый (серо-зеленый); колонии серые, коричневые.
Дифференциал ьно диагностическая среда № 10 (с маннитом)	Выявление стафилококков.	Появление желтых, выпуклых колоний, окруженных желтыми зонами вследствие ферментации маннита.

При проведении испытания мембранным методом от каждой серии препарата отбирают среднюю пробу не менее 6 г (мл), если нет другого указания в частных Фармакопейных статьях. В зависимости от физичес­ких свойств лекарственной формы образец для анализа готовят в виде раствора, суспензии или эмульсии:

твердые лекарственные формы, которые плохо растворяются, пред­варительно измельчают с использованием оборудования, исключающего дополнительное загрязнение микроорганизмами и суспензируют в фос­фатном буферном растворе рН 7,0 (или соответствующей жидкой пита­тельной среде), соблюдая соотношение объем препарата: объем буферно­го раствора 1:20;

жидкие лекарственные формы, а также твердые формы, растворяю­щиеся в буфере, готовят в виде растворов 1:10;

мягкие лекарственные формы, нерастворимые в воде, предваритель­но эмульгируют в фосфатном буферном растворе рН 7,0 с добавлением эмульгатора (например, твина - 80).

При подготовке к анализу используют стеклянные бусы при меха­ническом встряхивании и нагревании пробы до температуры не более 45 °С. Приготовленные образцы используют для определения общего ко­личества МАФАМ и условно-патогенных микроорганизмов, нормируе­мых в препаратах разных категорий.

Количественное определение микроорганизмов

Испытание проводят двухслойным агаровым методом в чашках Петри. Приготовленный раствор, суспензию или эмульсию препарата вносят по 1 мл в каждую из 2-х пробирок с 4 мл расплавленной и ох­лажденной до 45-50 °С среды № 1. Быстро перемешивают содержи­мое пробирки и переносят в чашку, содержащую 15-20 мл застывшей питательной среды № 1. Быстрым покачиванием чашки равномерно распределяют верхний слой агара до его застывания. Чашки инкуби­руют 5 суток при 30-35 °С.

При таком способе посева микроорганизмы, содержащиеся в ана­лизируемом образце, распределяются в тонком слое на поверхности сре­ды, где имеются благоприятные условия для роста аэробных и факульта­тивно-анаэробных бактерий. Слой питательной среды, предварительно внесенной в чашку, обеспечивает диффузию питательных веществ для прорастания колоний микроорганизмов.

После инкубирования посевов через 2 сут и окончательно через 5 сут подсчитывают число бактериальных колоний на двух чашках, нахо­дят среднее значение и умножают на показатель разведения для определе­ния числа МАФАМ в 1 г (мл) образца.

Для получения достоверных результатов учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 колоний. Если при посеве разведения препарата 1:10 на чашках нет роста, делают заключение о том, что в 1 г препарата содержатся менее 10 бактерий. Если число колоний превышает 300, делают ряд последовательных разведений образца.

Для определения общего числа грибов препарат засевают на среду № 2, используя двухслойный агаровый метод, как описано выше.

Количественное определение энтеробактерий за исключением Escherichia coli и Salmonella spp.

10 г или 10 мл испытуемого образца помещают в 100 мл среды №11, гомогенизируют и инкубируют при температуре 32,5±2,5 °С в тече­ние, как правило, двух часов, но не более пяти. В случае, если лекарствен­ное средство - суппозитории или растворы в маслах, в среду № 11 добав­ляют стерильный твин-80 в количестве не более 5 % и стеклянные бусы для эмульгирования.

Гомогенат перемешивают и готовят разведения 1:10 и 1:100, исполь­зуя для этого среду № 3. В три пробирки с 10 мл среды № 3 вносят 1 мл гомогената в первую, 1 мл разведения 1:10 во вторую и 1 мл разведения

1:100 в третью, то есть соответственно 0,1 г, 0,01 г, 0,001 г образца. Посе­вы инкубируют при температуре (32,5±2,5) °С в течение 24-48 ч. При наличии роста делают пересев петлей на плотную среду № 4 (агар Эндо) и инкубируют чашки Петри при той же температуре в течение 18-24 ч. В случае появления характерных для Enterobacteriaceae колоний грамот-рицательных палочек определяют количество энтеробактерий в 1 г или в 1 мл образца по табл. 29.

Таблица 29