16.3. Принципы микробиологического контроля нлс

Контроль осуществляют на всех предприятиях, выпускающих ле­карственные препараты, с целью оценки качества готовой продукции по показателю «микробиологическая чистота» и соответствия его установ­ленным требованиям. Исследования проводят в микробиологических ла­бораториях, аккредитованных в соответствии с ОСТ 42-503—95.

Схема анализа должна отвечать следующим требованиям:

• предельная краткость по времени и числу использованных тестов;

• использование методов, обеспечивающих точность количественного

подсчета и достоверную идентификацию нормируемых микроорга­низмов.

Микробиологический контроль лекарственных средств отличается от традиционного контроля пищевых продуктов или патологического материала. Отличие состоит в использовании сред обогащения при ана­лизе лекарственных препаратов на возможное присутствие условно-пато­генных микроорганизмов, которые могут находиться в препарате в не­большом количестве.

В таком случае прямой посев контаминированного препарата на плотные дифференциально-диагностические среды, как это делают в санитарной микробиологии при анализе продуктов, в большинстве случа­ев не приводит к обнаружению искомой группы бактерий за исключени­ем случаев высокой контаминации.

В средах обогащения (селективных) существуют условия для пре­имущественного роста и размножения определенных условно-патоген­ных микроорганизмов, иногда за счет добавления ингибиторов роста других бактерий. В благоприятных условиях начинает преобладать ис­комый вид (группа) микроорганизмов, хотя посторонние микроорганиз­мы могут присутствовать в незначительном количестве. Далее микро­организмы идентифицируют на основании их морфологических и био­химических свойств. Еще одной особенностью контроля лекарственных препаратов является определение их антимикробной активности и уст­ранение ее перед проведением анализа. Без этого возможно выявление только устойчивых к данному препарату микроорганизмов, что искажа­ет реально существующую ситуацию и не позволяет получать достовер­ные результаты.

Факторы, обеспечивающие достоверность результатов анализа Принципиальное значение имеет масса образца, т. е. количество препарата, взятого для анализа. Чем больше масса образца, тем выше ста­тистическая достоверность вывода об отсутствии патогенных микроор­ганизмов. Например, при массе образца для анализа 1-5 г предваритель­но контаминированного препарата условно-патогенные микроорганизмы удавалось выявить только при нескольких повторных анализах. При уве­личении массы образца до 10 г положительный ответ удавалось получить с первого раза.

Вторым фактором, обеспечивающим достоверность ответа, являет­ся качество питательных сред. Питательные среды должны быть изго­товлены в строгом соответствии с указаниями ГФ, из компонентов, отве­чающих по качеству требованиям ГОСТ. Они должны храниться в усло­виях, исключающих их высыхание или увлажнение, и проверены на рос­товые свойства и стерильность. Под ростовыми свойствами понимают способность питательной среды обеспечивать эффективный рост специ­альных штаммов тест-микроорганизмов. На ростовые свойства, проверя­ют каждую новую партию среды. Стерильность контролируют путем тер-мостатирования образца приготовленной среды после ее стерилизации (отбирают 5 % от всего количества).

Третий фактор, влияющий на достоверность ответа, это отсутствие антимикробной активности препарата. Чтобы исключить попадание в объекты анализа посторонних микроорганизмов, анализ проводят в стро­го асептичных условиях в специальном помещении, полностью изоли­рованном от процесса производства.

Схема анализа НЛС, не обладающих антимикроб­ным действием

В соответствии с требованиями НТД в НЛС определяют общее чис­ло бактерий и грибов, а также возможное присутствие условно-патоген­ных микроорганизмов. Для этого используют 15 различных питательных сред, каждая из которых имеет определенный номер (табл. 28). Схема и методы анализа являются одинаковыми для всех видов НЛС, независи­мо от их лекарственной формы (твердой, мягкой, жидкой). Схема анализа включает следующие этапы:

• обогащение культур;

• первичная дифференциация (разделение по группам) на диффе­ренциально-диагностических средах;

• выделение «чистых» культур микроорганизмов;

• изучение морфологических и биохимических свойств выделенных культур;

• заключение о присутствии (отсутствии) конкретных культур на ос­новании совокупности признаков.

Общий принцип микробиологического контроля состоит в анализе так называемой выборочной пробы и в перенесении результатов контро­ля на всю серию или партию препарата.

Выборочная проба -это образцы, отбираемые из всей массы иссле­дуемого объекта при соблюдении принципа случайности выборки. Сери­ей (ши партией) препарата называют определенное количество продук­та, изготавливаемого в условиях, которые считаются постоянными. Ос­новным требованием к серии (партии) является ее однородность по пока­зателям качества. Для анализа ГЛС от каждой серии (не зависимо от объе­ма) отбирают среднюю пробу не менее 50 г (мл), состоящую из равных разовых проб, взятых как минимум из 10 разных упаковок. Всего для про­ведения одного анализа по схеме используют 30 г лекарственного сред­ства: 10 г (мл) - для определения общего количества бактерий и грибов -мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов (МАФАМ), 10 г (мл) - для определения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae (или Escherichia coli и Salmonella spp.), 10г(мл)-для определения Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. В том слу­чае, когда необходимо подтвердить результат, проводят повторное испы­тание по конкретному разделу схемы анализа, используя при этом обра­зец 10 г (мл) из оставшегося от средней пробы.

Таблица 28