Лабораторная работа №7 Тема «Витамины. Гормоны» (2 часа) Цели:

1. Формирование знаний о классификации, номенклатуре витаминов, истории развития науки витаминологии, о механизмах действия, свойствах витаминов-коферментов

2. готовностью использовать основные методы защиты от возможных последствий аварий, катастроф, стихийных бедствий (ОК-11) профиль подготовки: Физическая культура. Безопасность жизнедеятельности (очная форма обучения);

3. способностью использовать возможности образовательной среды для формирования универсальных видов учебной деятельности и обеспечения качества учебно-воспитательного процесса (ПК-5) профиль подготовки: Физическая культура. Безопасность жизнедеятельности (очная форма обучения).

Содержание.

Проведение качественного и количественного анализа по определению витаминов и гормонов.

Обработка результатов анализа

Формулирование выводов

Работа с вопросами, тестами и расчетными задачами

Требования к умениям бакалавра. Знать:

1. принципы классификации, номенклатуры; краткие исторические сведения о развитии науки витаминологии.

2. нормы потребления витаминов по возрастным группам и при физических нагрузках, уметь обосновать их, основываясь на возрастных особенностях метаболических процессов в организме.

3. теоретический материал о строении, физически, химических свойствах, механизме действия важнейших витаминов А, С и витаминов-коферментов (РР, В₁, В₂, В₆, В₁₂, ТГФК, биотин), признаках гипо- и гипервитаминозов.

4. методики проведения качественных реакций обнаружения витаминов В₁, В₂, В₆, РР, фолиевой кислоты в биологических жидкостях.

5. принципы классификации гормонов, строение и механизмы их действия

Уметь:

Готовить образцы для анализа

Проводить качественный и количественный анализ

Прогнозировать изменение биохимических реакций при гипоавитаминозах

Аскорбиновая кислота широко рас­пространена в растениях. Отдельные растения (плоды шиповника, плоды незрелого грецкого ореха и др.) от­личаются особенно высоким

О О

содержанием витамина С. Аскорбиновая кислота представляет собой ненасы­щенное соединение с двумя энольными и двумя спирто­выми гидроксилами. Наиболее характерная

О О

особенность аскорбиновой кислоты — ее способность легко окислять­ся и восстанавливаться.

Аскорбиновая кислота быстро разрушается в присут­ствии окислителей. Более устойчива в кислой реакции среды.

Методика опыта. Метод определения основан на спо­собности аскорбиновой кислоты восстанавливать в кис­лой среде индикатор синего цвета — 2,6-дихлорфенолин-дофенол — до лейкоформы, при этом аскорбиновая кис­лота окисляется в дегидроаскорбиновую кислоту.

Ход определения. Навеску растительного материала (1 —10 г, в зависимости от содержания аскорбиновой ки­слоты) заливают в ступке 5 мл 1%-ного раствора НС1 и тщательно растворяют в фарфоровой ступке с кварцевым песком. Во время растирания приливают еще 15 мл 1%-ной НС1 и всю смесь количественно переносят в мерную колбу на 100 мл, споласкивая ступку 1%-ным раствором щавелевой кислоты. Объем взвеси в колбе доводят до метки щавелевой кислотой, предварительно перемешав ее, затем фильтруют через бумажный фильтр.

В конические колбочки помещают 5—10 мл фильтра­та и титруют раствором краски до ясно-розового окра­шивания, не исчезающего в течение 30 секунд Парал­лельно проводится контрольное титрование смеси приме­нявшихся реактивов.

Вычисление результатов производят по следующей формуле:

где а—миллилитров краски, израсходованной на титро­вание экстракта; б — миллилитров краски, пошедшей на контрольное титрование

Т — титр краски по аскорбиновой кислоте; Н — навеска исходного материала в анализируемой части экстракта.

Титр краски по аскорбиновой кислоте определяют следующим образом. В мерной колбе на 50 мл растворя­ют несколько кристалликов (1 —1,5 мг) аскорбиновой кислоты в 2%-ной H2SO₄. В две конические колбочки берут по 5 мл приготовленного раствора и после добав­ления кристалликов KJ (около 5—10 мг) и 5 капель 1%-ного раствора крахмала титруют одну колбочку ин­дикатором, другую — точно 0,001 н. раствором KJO₃. Рас­чет титра краски по аскорбиновой кислоте ведут по следующей формуле:

где Т— количество миллиграммов аскорбиновой кис­лоты, соответствующее 1 мл краски; 0,088 — количество миллиграммов аскорбиновой кис­лоты, соответствующее 1 мл 0,001 н. раствора йодата калия; а—миллилитров 0,001 н. раствора йодата калия, израсходованного на титрование раствора ас­корбиновой кислоты; б— миллилитров раствора краски, израсходован­ной на титрование.

Оборудование и реактивы. 1) Ступка. 2) Колба ко­ническая на 25—50 мл. 3) Пипетки. 4) Колбы мерные. 5) НС1 1-%ная.6) Щавелевая кислота 1%-ная. 7) 0,001 н. KJO₃. 8) KJ. 9) Крахмал 1%-ный, растворимый. Индикатор. Раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола при­готовляют растворением 200 мг краски в 1 л воды. К про­фильтрованному раствору на кончике ножа добавляют NaHCO₃. Титр краски по аскорбиновой кислоте опреде­ляют непосредственно перед опытом.

Реакции на инсулин. Реакция с разбавлен­ным раствором едкой щелочи. При добав­лении к раствору инсулина очень разбавленного раство­ра едкого натра или едкого кали выпадает хлопьевидный осадок, растворяющийся при подкислении.

Реактивы: а) раствор инсулина (в ампулах);

б) едкий натр или едкое кали, 0,1%-ный раствор;

в) уксусная кислота, 0,5°/0-ный раствор.

К 10—15 каплям раствора инсулина добавляют по каплям 0,1%-ный раствор гидроксида натрия до выпадения хлопьевидного осадка (рН 5,0—5,2), который раство­ряется при подкислении 0,5%-ным раствором уксусной кислоты до рН 2,5—3,5.

Реакции, свидетельствующие о белко­вой природе инсулина. С раствором инсулина проделывают реакции, доказывающие его белковую при­роду,— биуретовую, Миллона и др. (см. раздел Белки).