МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА Утверждаю
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ Заместитель начальника
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамента ветеринарии
(Минсельхозпрод России) В.В. селиверстов
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ
19.03.96 г. № 13-7-2/555
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по лабораторной диагностике
трихомоноза крупного рогатого скота.
1. Общие положения.
1.1. Трихомоноз - протозойная болезнь крупного рогатого скота,
вызываемая Trichomonas foetus, характеризуется поражением и
функциональным расстройством половой сферы. Течение болезни
преимущественно хроническое, но у коров и нетелей бывает острое.
1.2. Диагноз на трихомоноз устанавливают на основании
результатов микроскопического, культурального исследований
с учетом клинических и эпизоотологических данных.
1.3. Лабораторные исследования на трихомоноз включают:
микроскопию нативного материала;
посев материала на питательную среду;
дифференциацию возбудителей.
2. Отбор и пересылка материала для исследования.
2.1. Для исследования в лабораторию направляют: слизь из влагалища
или шейки матки от подозреваемого в заболевании животного; соскобы
со слизистой оболочки препуциального мешка, секрет придаточных
половых желез, сперму быка, выделения из половых органов; аборти-
рованный плод целиком или сычуг с содержимым, паренхиматозные
органы плода и часть плаценты.
2.2. Перед отбором материала для исследования моют наружные половые
губы у коров, область препуциального отверстия у быков тёплой водой и
вытирают чистым полотенцем.
2.3. Вагинально-цервикальную слизь берут в период течки. За день до
отбора материала рекомендуется вводить животным подкожно 1.5-2.0 куб.см 0.5%-
ного водного раствора прозерина или 1%-ного раствора карбохолина.
2.4. При отборе материала и его разведении используют водный
раствор хлорида натрия массовой концентрацией 8.5 г/куб.дм, рН 7.0-7.2
(далее раствор хлорида натрия).
2.5. Вагинально-цервикальную слизь берут полистироловыми пипетками.
Для этого к шприцу при помощи резиновой муфты присоединяют полистироловую
пипетку, набирают 5 куб.см раствора хлорида натрия и через раскрытое зеркалом
влагалище вводят его под давлением в шейку матки на глубину 3-4 см.
Затем, не извлекая пипетки, шприцем насасывают раствор хлорида
натрия со слизью, переносят в стерильную пробирку, которую закрывают
резиновой пробкой.
Вагинальную слизь можно брать ложкой-катетером, которую вводят во
влагалище животного без зеркала. При этом положение ложки должно быть
боковым, а ее стержня - горизонтальным. Ложкой делают соскобы из различных
мест слизистой оболочки влагалища и через канал стержня переливают в пробирку.
Если соскоб густой консистенции, через канал стержня вводят 5 куб.см раствора
хлорида натрия, затем насасывают, выливают в пробирку и закрывают пробкой.
2.6. От быков станций (предприятий) по искусственному осеменению
животных берут сперму и препуциальную слизь; от быков, используемых для
естественного спаривания, - препуциальную слизь и секрет придаточных половых
желез.
Сперму у быков получают при помощи искусственной вагины и переливают в
стерильные флаконы и пробирки.
Секрет придаточных половых желез у быков получают путем их массажа
через прямую кишку в стерильные пробирки или флаконы.
Слизь из различных мест слизистой оболочки препуция берут с помощью
прибора ПСБ-1. Смонтированный прибор вводят в полость препуция до ее
середины. Затем выдвинутым стержнем с наконечником и впитывающим тампоном
делают 3-4 возвратно-поступательных движения от свода препуциальной полости до
трубки прибора. Стержень втягивают в трубку, осторожно извлекают, опускают в
пробирку с 3 куб.см раствора хлорида натрия, тампон отжимают и извлекают,
пробирку закрывают резиновой пробкой.
2.7. Материал для исследования отбирают не раньше, чем через 6 дней
после профилактических орошении и через 10 дней после лечения
трихомонадоцидными препаратами.
2.8. Пробы секрета придаточных половых желез, неразбавленной
спермы, препуциальной, влагалищной слизи, патологических выделений в
пробирках или флаконах помещают в термос со льдом и нарочным доставляют в
лабораторию не позднее 4 ч. после отбора.
2.9. Абортированный плод целиком или сычуг с содержимым,
паренхиматозные органы плода, часть плаценты во влагонепроницаемой таре
доставляют в лабораторию не позднее 12 ч. после аборта. В холодное время
года плоды рекомендуется замораживать.
3. Микроскопическое исследование
3.1. С измененных участков плаценты делают соскобы и опускают во
флаконы.
Соскобы густой консистенции разбавляют раствором хлорида натрия
температуры 37°C в 2-5 раз.
3.2. Из доставленного для исследования патологического материала
делают по 2 препарата из каждого объекта. Жидкий материал (соскобы, слизь
препуциальная, влагалищная, секрет, патологические выделения) берут
пастеровской пипеткой со дна флакона или пробирки, каплю наносят на чистое
предметное стекло и накрывают покровным. Готовый препарат, исследуют методом
раздавленной капли под малым (х8-10), затем под средним увеличением
микроскопа (х40) в затемненном поле зрения.
3.3. В положительных случаях в препаратах обнаруживают живых три-
хомонад с ундулирующей мембраной и аксостилем, движения их скачкообразно-
поступательное или поступательно-вращательное. Дифференциацию трихомонад
проводят как указано в п.5.1.
4. Культуральное исследование
4.1. При Отсутствии трихомонад в исходных мазках проводят культу-
ральные исследования, используя среду Петровского или пептонно-агаровую
(приложение).
4.2. Каждую пробу (сперму, секрет, препуциальную, влагалищную
слизь, патологические выделения) от животного высевают в две пробирки со
средой. При исследовании абортированного плода пастеровской пипеткой делают
посевы из смеси содержимого грудной, брюшной полостей, сычуга, из печени,
легких, сердца, соскобов с измененных участков плаценты, околоплодной
жидкости в две пробирки со средой. В пробирки со средой вносят по 0,3-0,5
куб.см материала.
4.3. Засеянные пробирки инкубируют в термостате при 37+-1 гр.С в те-
чение 10 дн.
Посевы просматривают визуально на 3, 5, 7, 9 дн. При обнаружении
помутнения среды стерильной пипеткой берут каплю среды со дна пробирки и
готовят препарат. Если в препарате обнаруживают живых трихомонад,
исследование прекращают. <