МИНИСТЕРСТВО

СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА Утверждаю

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Заместитель руководителя

(Минсельхоз России) Департамента ветеринарии

Е.А.Непоклонов

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

09.11.2000 г. N 13-7-2/2183

Методические указания

по лабораторной диагностике

пироплазмидозов животных

1. Общие положения

2. Отбор и пересылка материала для исследования

3. Микроскопическое исследование

4. Дифференциальная диагностика возбудителей и оценка результатов

5. Постановка и учет реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с нутталлийным

антигеном ВИЭВ

6. Диагноз считают установленным при получении одного из следующих

показателей

7.Сроки исследования

1. Общие положения

1.1. Пироплазмидозы (бабезиоз, тейлериоз) - протозойные болезни жи-

вотных, вызываемые возбудителями отряда Piroplasmida. Возбудители пиро-

плазмидозов обладают видовой специфичностью.

Пироплазмидозы вызывают у лошадей - Рiroplasma сaballi (Bаbеsiа ca-

balli), Nuttallia equi (В. equi): у крупного рогатого скота - Р. bigeminum (В. bi-

gemina), Babesia bovis (Francaiella colchica), B. divergens; у овец и коз - P. ovis

(В. motasi). B.ovis; у собак Р. canis (B. canis).

Тейлериоз вызывают у крупного рогатого скота - Theileria annulata и Th.

sergenti; у овец и коз - Th. ovis.

Заболевания протекают остро, подостро, хронически и сопровождаются лихорадкой,

анемией, желтушностью и кровоизлияниями на слизистых оболочках,

гемоглобинурией (при пироплазмозе - бабезиозе), увеличением лимфати-

ческих узлов (при тейлериозе) и заканчиваются нередко гибелью животных.

1.2. Диагноз на пироплазмидозы ставят на основании эпизоотологических,

клинических, патологоанатомических данных и результатов лаборатор-

ных исследований (микроскопического, серологического).

1.3. Лабораторные исследования на пироплазмидозы включают:

микроскопию мазков из крови, внутренних органов, головного мозга,

пунктатов лимфатических узлов:

морфологическую дифференциацию возбудителей;

постановку и учет реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с

нуталлийным антигеном для диагностики пироплазмидозов лошадей.

2. Отбор и пересылка материала для исследования

2.1. В лабораторию для исследования направляют от подозреваемых в за-

болевании или больных животных: тонкие мазки крови из периферических со-

судов уха, хвоста или венчика; на тейлериоз дополнительно - мазки из пункта-

тов лимфатических узлов; 1 - 2 куб.см нативной сыворотки крови для серологиче-

ского исследования на нутталлиоз, пироплазмоз лошадей; от павших и убитых

животных - часть печени, легких, селезенки, почки, сердца, головного мозга и

лимфатические узлы.

2.2. Мазки крови берут а период развития симптомов болезни, при повы-

шенной температуре, до применения специфического лечения..

2.3. Перед отбором материала у животного шерсть на месте взятия крови

выстригают, кожу тщательно протирают в начале ватным тампоном, смочен-

ным а растворе этилового спирта, а затем сухим. Стерильной иглой делают

прокол вены ушной раковины или ножницами надрезают край верхушки уха

или хвоста. К свободной выступившей капле крови легко прикасаются поверх-

ностью сухого обезжиренного предметного стекла. Затем стекло быстро пово-

рачивают вверх каплей и удерживают пальцами левой руки в горизонтальном

положении. Шлифованным краем другого предметного стекла (или покровно-

го) прикасаются к капле крови. Как только кровь равномерно распределится по

ребру этого стекла, им быстро проводят по поверхности стекла справа налево

под углом 45°. Ширина мазка должна быть уже предметного стекла. Для каж-

дого нового мазка берут свежую каплю крови. От каждого животного готовят

по 2 мазка.

При исследовании большого количества подозрительных в заболевании жи-

вотных, размещенных в помещении при беспривязном содержании, можно брать

кровь с соблюдением правил асептики из яремной вены (V. Jugularis) одновремен-

но в 2 пробирки для приготовления мазков и получения сыворотки.

Для приготовления мазков кровь берут в пробирки, содержащие трилон Б*

(из расчета 0,1 куб.см 10% раствора трилона Б на 1 куб.см), в объеме 1,0 куб.см,

в другие пробирки - для получения сыворотки. Пробирки закрывают резиновыми пробкамИ.

Мазки крови готовят из трилоновой крови в лабораторных условиях в день

ее взятия. Готовые мазки крови высушивают на воздухе; подсушивать их над пла-

менем или на солнце нельзя. В холодное время года мазки делают в теплом поме-

щении или на стеклах, подогретых на крышке стерилизатора. Правильно приго-

товленные мазки должны быть тонкими, равномерными, достаточной длины и за-

канчиваться на 0,5 - 1,0 см от края стекла.

Кровь для получения сыворотки ставят в термостат (+37°С) или другое

теплое место; после полной ретракции сгустка, его отделяют от стенок пробир-

ки, обводя вокруг тонкой стерильной металлической спицей, и ставят в темное

(прохладное) место для отстаивания сыворотки. Используют для исследования

в РДСК сыворотку без следов гемолиза эритроцитов.