77. Перерахуйте найважливіші методи біотехнології рекомбінантних днк

До найбільш важливих методів біотехнології рекомбінантних ДНК слід віднести наступні:

• Специфічне розщеплення ДНК рестрикціюючими нуклеазами, що значно прискорює виділення різних генів і маніпуляцій з ними.

• Швидке секвенування всіх нуклеотидів в очищеному фрагменті ДНК, що дозволяє визначити точні межі гена і кодовану ним амінокислоту послідовність поліпептиду.

• Гібридизація нуклеїнових кислот, що дозволяє з великою точністю виявити специфічні нуклеотидні послідовності на основі їх здатності зв’язувати компліментарні основи.

• Клонування ДНК, суть якого зводиться до введення ДНК-фрагменту в генетичний апарат, що самореплікується (плазміну або вірус), який використовуються для трансформації бактерій. Бактеріальна клітина після трансформації здатна відновити цей фрагмент у багатьох мільйонах ідентичних копій.

• Генетична інженерія, що дозволяє одержувати модифіковані версії генів і потім вводити їх у клітини або організми.

78. Який вплив здійснила технологія рекомбінантних днк на клітинну біологію?

Технологія рекомбінантних ДНК справила істотний вплив на всю клітинну біологію, дозволяючи дослідникам виконувати завдання, що раніше не здавалося розв'язати неможливо, наприклад, визначати функції багатьох виявлених білків та його індивідуальних доменів, розшифровувати складні механізми регуляції експресії генів уеукариот. З допомогою методів генної інженерії вдалося було багато отримати багато білків, що у регуляції клітинної проліферації та розвитку. Застосування цих методів має дати успіх у великомасштабному промисловому виробництві білкових гормонів і штучних вакцин, отримання які раніше витрачали дуже багато зусиль і коштів.

79. Яка основна суть генетичної інженерії?

Суть генетичної інженерії зводиться до цілеспрямованого конструювання генетичних систем поза організмом з наступним введенням їх у живий організм. При цьому рекомбінатні ДНК стають складовою частиною генетичного апарату реципієнтного організму і, крім того, вони доповнюють його новими генетичними і фізіолого-біохімічними властивостями, корисними для людини. До числа таких властивостей можна віднести синтез амінокислот і білків, гормонів, ферментів, вітамінів та інше.

80. Що означає термін «зшивання генів»?

Зшивання генів (фрагментів) ДНК по «липких» кінцях, тобто взаємно комплементарних ділянках довжиною із 4-6 пар нуклеотидів, досить легко здійснювати ферментом ДНК-лігазою з утворенням ковалентного фосфодиефірного зв’язку між сусідніми нуклеотидами:За відсутності комплементарних «липких» кінців у фрагментах, які зшиваються, їх синтезують штучно ферментативним шляхом. З цією метою застосовують так звані лінкери (або «перехідники») – короткі ділянки ДНК, які мають різні «липкі» кінці:

81. Що означає термін «трансфекція»?

Трансфекція – процес інфікування клітин за допомогою чужорідних ДНК, який призводить до утворення зрілого фагового потомства.