30. Как устроен вич?

ВИЧ шаровидной формы, его диаметр 110 нм. Оболочка вируса имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположена молекула гликозилированного протеина gp120 (число 120 означает молекулярную массу белка в килодальтонах). Всего на поверхности вириона располагаются в виде своеобразных шипов 72 молекулы gр120, каждая из которых связана с внутримембранным белком gр41. Эти белки вместе с двойным липидным слоем образуют суперкапсид (мембрану) вириона/

Белки gр120 и р41 образуются в результате нарезания клеточной протеазой белка-предшественника Env. Белок gр41 формирует «ножку» шипа, связываясь цитоплазматическим доменом с располагающимся непосредственно под оболочкой матриксным белком р17МА. Молекулы р17, взаимодействуя при созревании вириона, образуют икосаэдр, подстилающий оболочку.

В центральной части вириона белок р24 образует конусообразный капсид. Суженная часть капсида при участии белка р6 связана с оболочкой вириона. Внутри капсида заключены две идентичньте молекулы вирусной геномной РНК. Они связаны своими 5’-концами с нуклеокапсидным белком р7NС. Этот белок интересен тем, что имеет два аминокислотных остатка (мотива), богатых цистеином и гистидином и содержащих атом Zn, — их называют «цинковыми пальцами», так как они захватывают молекулы геномной РНК для включения в формирующиеся вирионы. В состав капсида входят также три фермента. Ревертаза (КТ), или роl-комплекс, включает в себя обратную транскриптазу, Р1IК-азу Н и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу. Ревертаза присутствует в виде гетеродимера р66/р51. Протеаза (РR) — р10, запускает и реализует процесс созревания вириона. Интеграза (IN) р31, или эндонуклеаза, обеспечивает включение провирусной ДНК в геном клетки-хозяина, В капсиде содержится также молекула затравочной РНК (тРНК^ЛИЗ).

РНК-геном в клетке с помощью обратной транскриптазы превращается в ДНК-геном (ДНК-провирус), состоящий из 9283 нуклеотодных пар. Он ограничен слева и справа так называемыми длинными концевыми повторами, или LTR (англ. Iоng terminal repeat): 5’-LTR —- слева и 3’-LTR — справа. LTR содержат по 638 нуклеотидных пар.

Геном ВИЧ состоит из 9 генов. часть из которых перекрывается концами (имеет

несколько рамок считывания) и имеет экзон-интронную структуру. Они контролируют синтез 9 структурных и 6 регуляторных белков.

Схематически структура генома ВИЧ выглядит так:

5'-LTR – gag pol vif vpr tat rev vpu env nef – 3’-LTR

Структурные гены и белки

Гены Белки

gag р17, р24, рТ, рб

pol р10 (протеаза), р66/51 — ревертаза

(обратная транскриптаза), РНК-аза Н,

ДНК-зависимая ДНК-полимераза),

р31(интеграза, или эндонуклеаза)

env gp140,gp41

Регуляторные гены и белки

tat — р14 (ТАТ) vif — р23 (VIF)

геv — р12 (REV) vpu— рIб (VPU)

nef --- р27 (NEF) vрг — -- (VPR)

31. Что такое иммуноблотинг и для какой цели он применяется?

Метод иммуноблотинга представляет собой тестирование твердофазным иммунологическим анализом электрофоретически разделенных белков.

Этот метод применяется для более точной диагностики ВИЧ-инфекции, так как основной метод диагностики нередко дает ложнопозитивные результаты.