27. С помощью какой серологической реакции можно определить наличие вируса иммунодефицита в организме человека и в чем сущность этой реакции?

Основным способом диагностики ВИЧ-инфекции и особенно выявления вирусоносительства является использование метода иммуноферментного анализа. Недостатком этого метода является то, что нередко он дает ложнопозитивные результаты. Поэтому в случае сомнения такая сыворотка подвергается контрольному испытанию более чувствительными специфическими методами, например с помощью метода иммуноблотинга или иммунопреципитации.

Обнаружение АТ с помощью ИФМ:

• Первый этап – адсорбция специфических АГ на стенках луночек. Обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенстабилизированные луночки, т.е. на их стенках АГ уже адсорбированы.

• Второй этап – добавление в луночки образцов исследуемой сыворотки для обнаружения в них специфических АТ к данному АГ. Если они имеются, то вступают во взаимодействие с АГ и образуют комплекс АГ – АТ.

• Третий этап – после отмывания луночек в них добавляют специфические антиглобулиновые АТ (антивидовые, т.е. АТ против человеческих иммуноглобулинов), но меченные ферментом. Таким образом образуется комплекс АГ + АТ + меченое АТ. Результаты реакции учитывают в зависимости от характера метки. В качестве контроля используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные.

Предложены различные варианты иммуноферментного метода. Большое значение имеет вариант ИМФ, позволяющий осуществлять «захват» АТ, относящихся к IgM. Этот метод позволяет более точно производить серологическую диагностику, так как основан на обнаружении специфических иммуноглобулинов IgM, которые появляются в первую очередь при встрече с возбудителем.

28. Каков механизм реакции торможения гемагглютинации?

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) может быть использована для определения типа вируса или типа и титра АТ. Для определения типа вируса на предметное стекло наносят по одной капле вирусосодержащего материала (количество капель должно соответствовать количеству сывороток). В приготовленные капли последовательно вносят по одной капле типовых сывороток. Контролем служит физиологический раствор и нормальная сыворотка. Затем в каждую каплю вносят по одной капле 5%-ной взвеси эритроцитов. Результат регистрируют через 5 минут. При соответствии вируса типу сыворотки АТ связывают гемагглютинин вируса и гемагглютинация не наступает (РТГА положительная). Эта реакция может быть поставлена и в пробирках с целью титрования вируса или АТ (антигемагглютининов).

29. Какие существуют методы культивирования вирусов? Как типируют (идентифицируют) вирусы?

Методы культивирования вирусов в культуре тканей:

1. цитопатический эффект – дегенерация клеток, возникающая под действием размножающегося в культуре ткани вируса

2. гемадсорбция – адсорбция эритроцитов на поверхности пораженных вирусом клеток

3. цветная реакция

4. метод бляшек

5. метод флуоресцирующих АТ

Методы культивирования вирусов в курином эмбрионе:

1. вскрытие зараженных куриных эмбрионов и изучение изменений в них

2. постановка реакции гемагглютинации

3. определение типа вируса гриппа в аллантоисной жидкости с помощью реакции торможения гемагглютинации

Определение типа вирусов в вирусосодержащем материале основано на нейтрализации вируса типоспецифическими сыворотками. Конечный результат реакции может быть установлен на основании следующих признаков:

• нейтрализация ЦПД

• нейтрализация реакции гемадсорбции

• цветная проба

• задержка (торможение) гемагглютинации

• свечение клеток, содержащих вирус, под влиянием типоспецифических флуоресцирующих сывороток

• нейтрализация в опыте на животных