Ответы на билеты - микробиология. Модуль №1

1. Бактериофаги

Бактериофаги - вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК).

Типичная фаговая частица (вирион) состоит из головки и хвоста. Длина хвоста обычно в 2—4 раза больше диаметра головки. В головке содержится генетический материал — одноцепочечная или двуцепочечная РНК или ДНК с ферментом транскриптазой в неактивном состоянии, окружённая белковой или липопротеиновой оболочкой — капсидом, сохраняющим геном вне клетки.

Жизненный цикл:

• Адсорбция бактериофага на фагоспецифических рецепторах клетки.

• Инъекция фаговой нуклеиновой кислоты в клетку хозяина.

• Совместная репликация фаговой и бактериальной нуклеиновой кислоты.

Деление клетки.

• Далее бактериофаг может развиваться по двум моделям: лизогенный либо литический путь.

• Умеренные бактериофаги после деления клетки находятся в состоянии профага (Лизогенный путь).

• Вирулентные бактериофаги развиваются по Литической модели:

• Нуклеиновая кислота фага направляет синтез ферментов фага, используя для этого белоксинтезирующий аппарат бактерии. Фаг тем или иным способом инактивирует ДНК и РНК хозяина, а ферменты фага совсем расщепляют её; РНК фага «подчиняет» себе клеточный аппарат синтеза белка.

• Нуклеиновая кислота фага реплицируется и направляет синтез новых белков оболочки. Образуются новые частицы фага в результате спонтанной самосборки белковой оболочки (капсид) вокруг фаговой нуклеиновой кислоты; под контролем РНК фага синтезируется лизоцим.

• Лизис клетки: клетка лопается под воздействием лизоцима; высвобождается около 200—1000 новых фагов; фаги инфицируют другие бактерии.

Фаги делят на 5 морфологических типов :

І тип – нитевидные ДНК – содержащие, лизируют F-плазмидные бактерии.

II тип – мелкие РНК – содержащие фаги с 1 – нитевой ДНК

ІІІ тип (фаги Т3, Т4) с коротким отростком

ІV тип- с несокращающимся чехлом отростка и 2- нитевой ДНК

V тип – ДНК – содержащие фаги с сокращающимся чехлом отростка, заканчивающимся базальной пластинкой разной формы (Т2, Т4, Т6).

Фаги инактивируются при t больше 65 – 70 градусов.

2. Специальные методы окрашивания бактериальных структур

Методы окраски:

1. Простые ( одним красителем)

2. Сложные (по Граму, Цилю – Нильсену, несколько красителей)

Метод «висячей» капли

Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которого предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находиласьв центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края.

Метод «раздавленной» капли.

На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покрывным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла.

Прижизненная (витальная) окраска.

Взвесь микроорганизмов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрально красного. Затем готовят препарат «висячая» или «раздавленная» капля и микроскопируют.

Окраска по Граму:

• На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1- 2 мин ее снять, а краситель смыть.

• Нанести раствор люголя на 1-2 мин.

• Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красител.

• Промыть водой

• Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темнее – фиолетовый цвет, грамотрицательные- в красный.

Окраска по Цилю – Нильсену:

• На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течнии 3-5 мин.

• Снять бумагу, промыть мазок водой.

• Нанести 5% раствор серной кислоты или 3 % раствор смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1- 2 мин для обесцвечевания.

• Промыть водой.

• Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин.

• Промыть водой, высушить, микроскопировать