Работа 15. Ванилин из лигнина

Цель работы: получение ванилина из лигнина.

Материалы: древесные опилки или подсолнечная лузга, спирт этиловый, бензол, кислота серная, раствор натрия гидроксида, нитробензол, раствор бисульфита натрия.

Ход работы

Измельченную подсолнечную лузгу или древесные опилки (50 г) настаивают в смеси спирта и бензола (1:1) в течение суток для удаления жиро - восковых примесей. Раствор отделяют на фильтре и промывают небольшим количеством чистого растворителя. Высушенный на воздухе остаток переносят в коническую колбу, заливают 50 мл 72%-ной серной кислоты и оставляют стоять 48 час. Затем в колбу наливают 400 мл воды и кипятят около часа для завершения гидролиза полисахаридов. После охлаждения осадок лигнина отсасывают, промывают большим количеством воды и высушивают.

10 г полученного лигнина загружают в автоклав из нержавеющей стали, добавляют 300 мл 2 н раствора гидроксида натрия и 40 мл нитробензола. Автоклав нагревают 3 часа, поддерживая температуру 170^оС.

После охлаждения, содержимое автоклава переносят в фарфоровую чашку и упаривают на водяной бане до половины объема. Раствор ванилата натрия отфильтровывают от примесей и нейтрализуют слегка разбавленной серной кислотой до рН 4,5 – 5. Чтобы отделить коллоидные примеси, способствующие образованию эмульсии, нейтрализованный раствор центрифугируют (или отстаивают 10 – 12 час). Проводят извлечение бензолом. Для этого в колбу наливают 25 мл бензола, присоединяют обратный холодильник и нагревают на водяной бане. Слегка охлажденную смесь переносят в делительную воронку и после встряхивания и отслаивания нижний водный слой сливают. Этот слой повторно обрабатывают бензолом.

Объединенную после трех обработок бензольную вытяжку отгоняют досуха, а остаток, содержащий загрязненный ванилин, смешивают с насыщенным раствором бисульфита натрия. Ванилин дает хорошо растворимое в воде бисульфитное соединение. Далее раствор подкисляют 10%-ной серной кислотой и удаляют сернистый газ продуванием воздуха. Ванилин выпадает в осадок, который после подсушивания перегоняют при 13 мм рт. ст.(т. кип. 163 – 166).

Чтобы окончательно очистить ванилин, его растворяют в минимальном количестве воды, нагревая до 50°С. По охлаждении выпадают кристаллы [16]

Работа 16. Специфичность действия амилазы слюны

Цель работы: изучение специфичности действия амилазы слюны человека на ди- и полисахариды.

Материалы: амилаза слюны (слюна разведена дистиллированной водой 1:10), раствор крахмала, раствор сахарозы, раствор йода, реактив Троммера.

Ход работы

Амилаза относится к гидролитическим ферментам, действующим на гликозиды. Она содержится в панкреатическом и кишечном соке, а у некоторых животных и человека – в слюне.

Под влиянием амилазы крахмал расщепляется до дисахарида мальтозы через ряд промежуточных продуктов различной сложности - декстринов.

Готовят две инкубационные пробы, как указано в таблице, используя в качестве субстратов для амилазы два вещества: крахмал (1%-ный) и сахар (1%-ный).

№ пробы	Амилаза слюны, мл	Раствор крахмала, мл	Раствор сахарозы, мл	Проба Троммера (+ или -)	Реакция раствором йода
1 2	1 1	1 -	- 1

Пробы выдерживают в термостате 15 мин при 37 °С. Затем с первой пробой (субстрат - крахмал) проделывают две реакции: пробу Троммера (10 капель 10%-ного NaOН и 2 капли 1%-ного CuSO₄) и реакцию с раствором йода (к 5 каплям инкубационной смеси добавляют 1 - 2 капли раствора йода). Со второй пробой проделывают реакцию Троммера. Вносят в таблицу результаты реакций.