Работа 13. Тирозин из шелка

Цель работы: выделение тирозина из натурального шелка.

Материалы: шелк натуральный, кислота серная, раствор гидроксида бария, реактив Миллона, кислота соляная, раствор нитрита натрия, формалин.

Ход работы

В круглодонную колбу наливают раствор 22 мл концентрированной серной кислоты в 80 мл воды и вносят, перемешивая, натуральный шелк (100 г). Колбу закрывают пробкой с длинным обратным воздушным холодильником, и начинают гидролиз, нагревая реакционную смесь на водяной бане. Когда основная часть шелка растворится, в колбу бросают несколько кусочков пористого фарфора и продолжают нагревать на сетке 15 час.

Охлажденный раствор фильтруют. В фильтрат прибавляют горячий 20%-ный раствор гидрата окиси бария (до слабощелочной реакции на фенолфталеин). Осадок сульфата бария отфильтровывают и кипятят его еще раз с 25 мл чистой воды – для извлечения тирозина, увлеченного осадком. Операцию повторяют до тех пор, пока новая проба фильтрата станет давать лишь слабую реакцию на тирозин с реактивом Миллона.

Объединенный фильтрат концентрируют в фарфоровой чашке на водяной бане до начала кристаллизации. Упаренный раствор оставляют на холоде и отфильтровывают выпавший тирозин. Чтобы очистить продукт, осадок растворяют в горячей воде, кипятят 15 мин с активным углем, фильтруют горячим и вновь ставят на кристаллизацию.

Качественные реакции

1. Тирозин дает характерное, цвета красного мяса окрашивание с реактивом Миллона.

2. Несколько мл раствора тирозина обрабатывают 0,5 мл 0,04 н раствора HCl и 0,2 мл 2%-ного раствора нитрита натрия. Смесь нагревают 10 минут на водяной бане. Появляется желтая окраска, переходящая постепенно через розовую и фиолетовую в зеленую. Окрашенный в фиолетовый цвет нитрозамин может быть извлечен амиловым спиртом.

3. Проба Мернера. Реактив приготавливают, смешивая 0,1 объема 40%-ного раствора формалина с 4,5 объемами воды и 5,5 объемами концентрированной HCl. Несколько миллилитров реактива нагревают до кипения с тирозином или его раствором – появляется устойчивая зеленая окраска [16].

Работа 14. Цистин из шерсти

Цель работы: выделение цистина из шерсти.

Материалы: шерсть овечья сырая, кислота соляная, биуретовый реактив, ацетат натрия, индикатор конго.

Ход работы

Сырую овечью шерсть (200 г) освобождают от механических загрязнений, промывают слегка теплым мыльным раствором, тщательно прополаскивают дистиллированной водой и просушивают.

Подготовленную шерсть помещают в двухлитровую круглодонную колбу, заливают 400 мл 20%-ной HCl и, снабдив колбу обратным холодильником, проводят гидролиз, нагревая смесь 5 – 6 час на сетке. Процесс считают законченным, когда проба гидролизата покажет отрицательную биуретовую реакцию.

Горячую массу фильтруют, промывают дистиллированной водой. В фильтрат, объединенный с промывными водами, добавляют кристаллический ацетат натрия до тех пор, пока проба на минеральную кислоту (по конго) не станет отрицательной. Уксуснокислый раствор оставляют на двое суток в холодильнике для кристаллизации цистина. Выпавшие кристаллы отсасывают. Чтобы очистить сырой цистин от пигментов, его растворяют в возможно малом количестве кипящей 3%-ной HCl и повторным кипячением с новыми порциями активного угля полностью обесцвечивают (требуется от 2 до 5 обработок каждый раз с 2 г угля).

Бесцветный или слегка желтоватый раствор фильтруют горячим через складчатый фильтр и добавляют профильтрованный насыщенный раствор ацетата натрия (40 - 50 г) до отрицательной реакции на конго. По мере охлаждения начинает кристаллизоваться цистин. Через 5 – 6 часов его отфильтровывают и дважды промывают горячей водой (для удаления остатков тирозина) [16].