Работа 7. Выделение белков из растительного сырья

Цель работы: выделение и изучение белков растительного происхождения (пшеничная и гороховая мука).

Материалы: пшеничная мука, гороховая мука, биуретовый реактив, хлорид натрия, спирт этиловый.

Ход работы

Выделение альбуминов. В пробирку вносят 1 г пшеничной муки, добавляют 10 мл воды и содержимое перемешивают. Пробирку ставят в термостат или в стакан с теплой водой при 30 – 35 °С на 30 мин. Содержимое пробирки периодически перемешивают. Через 30 мин надосадочную жидкость, содержащую альбумины, отфильтровывают.

Часть фильтрата (1 – 3 мл) используют для биуретовой реакции на белок, а к другой части раствора добавляют примерно равный объем насыщенного раствора хлорида натрия. При этом раствор мутнеет, так как альбумины в присутствии солей теряют растворимость.

Выделение глобулинов. В пробирку вносят 1 г гороховой муки, 10 мл 10 %-го раствора хлорида натрия и содержимое пробирки перемешивают. Извлечение глобулинов проводят при температуре 30 – 35^оС в течении 30 мин. Через 30 мин жидкость отфильтровывают или центрифугируют и проводят пробу на присутствие белка биуретовой реакцией.

Глобулины не растворяются в чистой воде, поэтому если из раствора удалить соль, то глобулины выпадут в осадок. В холщовый или полиэтиленовый мешочек наливают отфильтрованный раствор и помещают его в стакан с проточной водой. Диализ длится 1,5 – 2 часа. По мере обессоливания раствора белки выпадают в осадок.

Выделение проламинов. В пробирку вносят 1 г пшеничной муки и 10 мл 70%-го этилового спирта. Экстракцию белков ведут при 30 – 35 °С в течении 30 мин при периодическом перемешивании. Через 30 мин надосадочную жидкость отфильтровывают. Фильтрат разбавляют в два раза водой, при этом концентрация спирта резко падает, и спирторастворимые белки – проламины теряют растворимость. Раствор мутнеет [16].

Работа 8. Выделение белков куриного яйца

Цель работы: выделение и изучение белков куриного яйца.

Материалы: белок куриного яйца, раствор сульфата натрия насыщенный, кислота серная, сульфат натрия, биуретовый реактив.

Ход работы

5 мл свежего куриного белка смешивают с равным объемом 36,7%-ного раствора сульфата натрия. Выпавшие в осадок глобулины отфильтровывают, к фильтрату прибавляют 1 н серную кислоту до рН 4,7 и безводный сульфат натрия до появления легкой опалесценции.

При хранении раствора в холодильнике образуются кристаллы яичного альбумина, которые оседают на дно [16].

С полученными белками проводят биуретовую реакцию.

Работа 9. Выделение белков молока

Цель работы: выделение и изучение белков молока.

Материалы: молоко сырое, кислота уксусная, биуретовый реактив, сульфат аммония, бура.

Ход работы

50 мл сырого молока нагревают до 40-50 °С и вносят при помощи пипетки несколько капель концентрированной уксусной кислоты. Выпавший осадок казеина отфильтровывают. Фильтрат используют для выделения других белков, а осадок осторожно снимают стеклянной палочкой с фильтра в пробирку и проделывают с ним биуретовую реакцию.

2 - 3 мл фильтрата кипятят до появления хлопьев лактоальбумина и лактоглобулина.

К 5 мл фильтрата в другой пробирке добавляют сульфат аммония до полунасыщения. Выпадают хлопья глобулина, который отфильтровывают.

Лактоальбумин выпадает в осадок в виде хлопьев при добавлении к 5 мл фильтрата в третьей пробирке сульфата натрия до полного насыщения. Хлопья альбумина также отфильтровывают. Полученные осадки снимают с фильтра и проделывают с ними биуретовую реакцию.

Казеин, полученный путем осаждения кислотами, называют кислотным (в отличие от сычужного, получаемого ферментированием). Для кислотного казеина характерна растворимость в 3%-ном растворе буры. Для этого в химический стакан на 100 мл отвешивают 5 г полученного кислотного казеина, приливают 25 мл 3%-ного раствора буры, тщательно перемешивают и оставляют для растворения на 1 час на водяной бане при температуре 50°С. Содержимое стаканчика перемешивают стеклянной палочкой через каждые 10 мин. Наблюдения заносят в журнал [16].