Лабораторная работа № 18 определение общего гемоглобина методом щелочной денатурации

Значение метода: У детей при рождении количество гемоглобина выше, чем у взрослого (60-70%). Нв у новорожденного составляет фетальный гемоглобин и 30-40% Нв (взрослого типа). После рождения фетальный гемоглобин убывает и к 5-6 месяцам жизни составляет 1-2 % всего Нв. Фетальный Нв отличается от взрослого рядом свойств: он растворяется при более высоких концентрациях солей, более устойчив к щелочам, имеет другую электрофоретическую подвижность. Определение фетального гемоглобина имеет большое значение не только у детей, но и у взрослых при различных патологических состояниях, например при гипоксиях (пневмонии, инфаркте миокарде, гепатите, хроническом бронхите и др).

Принцип метода: Основан на большой устойчивости фетального Нв к щелочам.

Ход работы: В пробирку отмеряют 4,9 мл 0,04% р-ра NН4ОН и 0,1 гемолизата. Жидкость встряхивают 2-3 мин. Оптическую плотность определяют с зеленым светофильтром в кювете на 0,3 см против воды. Количество Нв определяют по калибровочному графику в г/л.

Норма = 130-185г/л.

Лабораторная работа № 19 определение билирубина методом иендрашека

Значение метода: Для дифференциальной диагностики желтух необходимо определить, за счет какой фракции возникает билирубинемия.

Пигменты	Желтухи
	Механическая	Острый гепатит	Гемолитическая
Свободный билирубин крови	Не изменен	Незначительно повышен	Резко повышен
Связанный билирубин крови	Резко повышен	Значительно повышен	Незначительно повышен
Билирубин мочи	Значительно повышен	Незначительно повышен	Не изменен
Уробилин мочи	Не изменен или снижен	Значительно повышен	Резко повышен
Стеркобилин кала	Снижен	Не изменен или снижен	Резко повышен
Органоспецифические ферменты	Умеренная гиперферментемия	Резкая гиперферментемия на ранних стадиях	Не изменены

Принцип метода: при добавлении кофеинового реактива к сыворотке весь билирубин переходит в диссоциированное состояние и дает розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом. Без добавления кофеинового реактива окрашивание с диазореактивом дает только холебилирубин. По интенсивности окраски определяют светопоглащение.

Ход работы:

Реактивы	Пробирка 1	Пробирка 2	Пробирка 3
	Общий билирубин	Холебилирубин	Контроль
Сыворотка крови	0,5мл	0,5мл	1,0 мл
Физ. раствор	-	1,75мл	0,5 мл
Кофеиновый реактив	1,75мл	-	3,5 мл
Диазосмесь 10 мл диазо 1 0,3 мл диазо 2	0,25мл	0,25мл

Для развития окраски общего билирубина пробу оставляют на 20 минут. Холебилирубин колориметрируют через 10-15 минут после добавления смеси. При более длительном стоянии в реакцию вступает гембилирубин. Обе пробирки колориметрируют против контроля в кюветах на 0,5 см с зеленым светофильтром. Количество гембилирубина определяют по разности общего и холебилирубина.

Норма: общий 4,2-20,5 мкМоль/л, холебилирубин 1,0-5,2мкМоль/л.

гембилирубин 3,2-15,4 мкМоль/л.