Лабораторная работа № 6 определение глюкозы о-толуидиновым методом.

Принцип метода: Альдогексозы (глюкоза, галактоза, ксилоза ) при нагревании с орто- толуидином в кислой среде дают синезеленое окрашивание, интенсивность которого определяется колометрически.

Ход работы: 0,2мл сыворотки крови (спинномозговой жидкости) вносят в пробирку с 2мл 6% ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают и фильтруют. К фильтрату приливают 2мл. О-толуидинового реактива и ставят на 8 минут в кипящую баню. После охлаждения (15 мин) фотометрируют при красном светофильтре. В качестве контроля используется вода. Параллельно определяют светопоглощение стандартного раствора глюкозы (0,05мл глюкозы) обработанного так же, как и опытная проба.

А

Расчет: ------ х 200 = мг %

Б х 4

А-светопоглошение образца

Б-светопоглощение раствора глюкозы (800 мг на 100мл)

Норма: кровь –70-110мг %, плазма-60-100мг %, спинномозговая жидкость-45-70мг %.

Лабораторная работа № 7

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА).

Принцип метода:

В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2

-------------------------

ФАД

ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2

Образующаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.

Ход работы: 0,2 мл сыворотки крови вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный водой фильтр. К фильтрату прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 2 капли раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 10мин. фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистилированой воды.

Количество глюкозы в сыворотке определяется по калибровочному графику.

Норма: 3,5-5,7 ммоль/л.

Лабораторная работа № 8 качественная реакция на определения сахара в моче - реактив ниландера.

Реакция Ниландера относится к окислительно-восстановительным методам определения сахара. Она основана на окислении глюкозы солью висмута Вi (NO3)2 в щелочной среде. При кипячении, в случае наличия сахара в моче, выпадает черный осадок

металлического висмута.

O

|| 2+ ОН

R-C-H + Bi ---------------- R- COOH + Bi

t

Ход работы:

К 1-2 патологической мочи прибавляют 0,5-1мл реактива Ниландера и кипятят 2 мин.

Лабораторная работа № 9 турбидиметрический метод определения бета- липопротеидов сыворотки крови по бурштейну и самаи.

Значение метода: По изменению липопротеидов сыворотки можно судить о различных патологических процессах организма человека. Увеличение содержания бета-липопротеидов- наиболее часто встречающееся в липограмме отклонение от нормы. Оно отмечается при атеросклерозе, внутрипеченочном холестазе, механической желтухе, диабете, при резких гипопротеинемиях, гликогенозах, ксантоматозе и др. Увеличение бета-липопротеидов в крови тесно связано с гиперхолестеринемией, поскольку холестерин входит в состав, главным образом, бета-липопротеидов.

Принцип метода: Метод основан на избирательном осаждении бета-липопротеидов с помощью гепарина в присутствиии ионов Са. Введение гепарина в присутствии Са вызывает связывание бета-липопротеидов и помутнение раствора, оптическую плотность которого можно измерить на ФЭКе. Степень помутнения соответствует концентрации бета-липопротеидов.

Ход работы: К 2мл 0,025М р-ра СаСI2 добавляют 0,2 мл сыворотки крови и оптическую плотность р-ра определяют на ФЭКе (Е1) в кювете толщиной 0,5 см с красным светофильтром против воды. Затем в кювету добавляют 0,04мл 10% р-ра гепарина и содержимое перемешивают. Бета-липопротеиды образуют комплекс с гепарином, дающий помутнение р-ра. При этом оптическая плотность увеличивается (Е2). Определяют точно через 4мин после добавления гепарина. Разница Е1 – Е2 приходится на оптическую плотность, обусловленную липопротеидами. Количественную оценку проводят по калибровочному графику и выражают в мг%.

Норма 300-400мг% (3-6 г/л).

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 10