- •Сведения о научной работе
- •Аннотация научной работы под девизом-шифром «Биодеструкция нефти»
- •Характеристика научной работы
- •Апробация нир
- •Содержание
- •Глава 1. Литературный обзор
- •1.1 Компоненты нефти и их воздействие на окружающую природную среду
- •1.2 Влияние нефтяного загрязнения на микробиологические процессы в почве
- •1.3 Биодеградация нефти
- •1.4 Методы оценки нефтяного загрязнения почв
- •1.4.1 Нормирование загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами
- •1.4.2 Методы контроля
- •1.4.2.2 Газовая хроматография
- •1.5 Методы восстановления нефтезагрязненных экосистем
- •1.5.1 Методы рекультивации нефтезагрязненных почв
- •Глава 2 Экспериментальная часть
- •2.1 Объект исследования
- •2.2 Биопрепарат
- •2.3 Исследование биодеструкции нефраса углеводородокисляющими микроорганизмами биопрепарата «мд»
- •2.4 Приготовление минеральной и питательной сред
- •2.5 Способы стерилизации
- •2.6 Методика определения количества клеток высевом на плотные питательные среды (метод Коха)
- •2.6.1 Приготовление разведений
- •2.6.2 Посев
- •2.6.3 Подсчет выросших колоний
- •2.7 Химический анализ методом газовой хроматографии
- •2.8 Анализ метаболитов методом хромато-масс-спектрометрии
- •2.9 Оценка эффективности деструкции нефти углеводородокисляющими микроорганизмами
- •2.10 Изучение деструкции нефти биопрепаратом «мд» (сухой) в пробах сапропели методом ик-спектроскопии
- •2.10.1 Объекты и методы исследования
- •2.10.2 Анализ нефти методом ик-спектроскопии
- •Глава 3. Результаты и их обсуждение
- •3.1 Изучение процесса деструкции нефраса углеводородокисляющими микроорганизмами биопрепарата «мд» методом газовой хроматографии
- •3.2 Оценка эффективности деструкции нефти углеводородокисляющими микроорганизмами методом газовой хроматографии
- •3.3 Изучение деструкции нефти биопрепаратом «мд» (сухой) в пробах сапропели методом ик-спектроскопии
- •Список литературы
2.5 Способы стерилизации
Перед каждым экспериментом посуда, оборудование и материалы проходили стадию стерилизации.
Осуществляли стерилизацию 2 способами:
- термическим: паровая и воздушная (сухожаровая);
- химическим: химическими растворами (стерилянтами).
Термическую (паровую) стерилизацию осуществляли подачей насыщенного водяного пара под давлением в автоклаве WiseClave WAC 1047.
Химические методы стерилизации (70%-ный раствор этилового спирта) применяли для обеззараживания ламинарного шкафа. В ламинарном боксе производили посев микроорганизмов на различных питательных средах: мясо-пептонный бульон (МПБ) — жидкая среда; мясо-пептонный агар (МПА) — плотная среда.
Посев производился на плотную среду (МПА) для определения численности и отображения динамики роста углеводородокисляющих микроорганизмов по методу Коха.
2.6 Методика определения количества клеток высевом на плотные питательные среды (метод Коха)
Метод Коха широко применяют для определения численности жизнеспособных клеток в различных естественных субстратах и в лабораторных культурах. В его основе лежит принцип Коха, согласно которому каждая колония является потомством одной клетки. Это позволяет на основании числа колоний, выросших после посева на плотную питательную среду определенного объема исследуемой суспензии, судить об исходном содержании в ней клеток микроорганизмов. Результаты количественного определения микроорганизмов, проведенного по методу Коха, часто выражают не в числе клеток, а в условных, так называемых колониеобразующих единицах (КОЕ). Определение числа микроорганизмов этим методом включает три этапа: приготовление разведений, посев на плотную среду в чашки Петри и подсчет выросших колоний.
2.6.1 Приготовление разведений
Численность популяции микроорганизмов обычно велика, поэтому для получения изолированных колоний готовили ряд последовательных разведений. Разведения готовили в стерильной водопроводной воде. В ходе опыта использовали один и тот же коэффициент разведения, 10, это уменьшает вероятность ошибки.
Для приготовления разведений стерильную водопроводную воду разливали по 9 см3 в стерильные пенициллиновые флаконы (пенициллинки). Затем 1 см3 исследуемой суспензии стерильным одноразовым шприцем объемом 1 мл переносили во флакон с 9 см3 стерильной воды – это первое разведение (101). Полученное разведение тщательно перемешивали, несколько раз вбирая в шприц и выпуская из него полученную суспензию клеток. Затем тем же шприцем отбирали 1 мл суспензии и переносили во вторую пробирку, получая второе разведение (102). Таким же образом готовили последующие разведения. Степень разведения зависит от плотности исследуемой популяции микроорганизмов; соответственно она тем больше, чем больше плотность популяции.
Для приготовления каждого разведения следует обязательно использовать новый шприц. Пренебрежение этим правилом приводит к получению ошибочного результата вследствие высокой способности клеток микроорганизмов к сорбции на поверхности многих материалов.