Репликация днк

Одним из основных свойств наследственного материала является способность ДНК к самоудвоению – репликации. Репликация происходит в синтетическом периоде интерфазы. В процессе репликации на каждой полинуклеотидной цепи материнской молекулы ДНК синтезируется комплементарная ей дочерняя нить. В итоге из одной двойной спирали ДНК образуются две идентичные двойные спирали. Такой способ репликации называется полуконсервативным, т.к. в образовавшихся молекулах ДНК, одна нить – материнская, другая – дочерняя.

Для репликации цепи материнской ДНК должны быть отделены друг от друга, чтобы стать матрицей. Для этого фермент ДНК – геликаза разрушает водородные связи между азотистыми основаниями цепей ДНК. Отделившиеся цепи выпрямляются при помощи дестабилизирующих белков с образованием репликационной вилки. Синтез дочерних цепей ДНК осуществляется при помощи фермента ДНК-полимераза. Однако, для начала синтеза необходима РНК- затравка (синтезируемая при помощи РНК-праймазы), из 10 нуклеотидов для получения свободного С³-конца с ОН группой. Синтез дочерней нити в направлении 5-3 строится непрерывно и эта нить называется лидирующей. В связи с тем, что противоположная цепь ДНК антипараллельна, то фермент ДНК-полимераза не может присоединять нуклеотиды в противоположном направлении, поэтому другая дочерняя цепь строится участками – фрагментами Оказаки. В каждом фрагменте направление синтеза 5-3 и начинается синтез также с РНК-затравки. В дальнейшем при помощи фермента ДНК-лигазы убирается РНК-затравка и сшиваются фрагменты Оказаки, поэтому эта нить несколько отстает от лидирующей нити и ее называют - запаздывающей (направление нити 3-5).

У прокариот фрагменты Оказаки содержат от 1000 до 2000 нуклеотидов, у эукариот они короче – от 100 до 200 нуклеотидов. Скорость синтеза белка у прокариот 1000 нуклеотидов секунду, у эукариот – 100 нуклеотидов в секунду. Фрагмент ДНК от точки начала репликации до точки ее окончания образует единицу репликации репликон. У прокариот вся ДНК – один репликон, у эукариот ДНК содержит большое количество репликонов (у человека 50 000 репликонов).

Уровни компактизации ДНК

Известно 5 уровней компактизации ДНК:

1 – нуклеосомный

2 – нуклеомерный

3 – хромомерный

4 – хромонемный

5 – хромосомный.

1 - Нуклеосомный уровень компактизации ДНК представлен нитью ДНК и белками-гистонами и напоминает цепочку бус. Гистоны представлены пятью фракциями: Н1, Н2А, Н2В, Н3, Н4. Являясь положительно заряженными основными белками, гистоны достаточно прочно соединяются с молекулой ДНК, чем препятствуют считыванию заключенной в ней биологической информации. В этом состоит их регуляторная функция.

Н1 – богатый лизином гистон

Н2А, Н2В – умеренно богатый лизином гистон

Н3, Н4 – богатый аргинином гистон

В нуклеосомы входят 8 молекул четырех фракций гистоновых белков: Н2А, Н2В. Н3 и Н4, которые образуют октамер. Вокруг октомера оборачивается нить ДНК 1,7 раза, которую удерживает гистон Н1. Октомер с нитью ДНК является нуклеосомой. Между нуклеосомами нить ДНК называется линкерной нитью. Количество нуклеотидных пар в нуклеосоме и линкере 200-240. Уменьшение нити ДНК за первый нуклеосомный уровень - в 7 раз.

2 - Нуклеомерный уровень – представлен глобулами, состоящими из 8-12 нуклеосом.

3 - Хромомерный уровень – представлен петлями у основания которых находятся кислые негистоновые белки, которые способны узнавать специфические нуклеотидные последовательности вненуклеосомной ДНК. Эти белки сближают указанные участки с образованием петель. Уменьшение нити ДНК в 30 раз.

4 - Хромонемный уровень – появляется за счет сближения в линейном порядке хромомерных петель с образованием хромонемной нити.

5 – Хромосомный уровень – образуется в результате спиральной укладки хромонемы (или хроматиды). Хромосомный уровень является максимальной степенью компактизации ДНК и достигается в метафазе митоза (мейоза).

Неодинаковая степень компактизации разных участков хромосом имеет большое функциональное значение. В зависимости от состояния хроматина выделяют эухроматиновые участки хромосом, отличающиеся меньшей плотностью компактизации в которых находятся активные гены и которые способны быстрой декомпактизации и транскрипции для синтеза белка.

Гетерохроматиновые участки характеризуются отсутствием активных генов и более высокой плотностью компактизации ДНК. Различают структурный (конститутивный) и факультативный гетерохроматин.

Структурный образован нетранскрибируемой (саттелитный) ДНК. Содержится в теломерных и околоцентромерных участках.

Примером факультативного гетерохроматина служит тельце Бара, которое является одной из двух Х-хромосом у женщины.

Фракции ДНК:

1 – фракция уникальных повторов – 1-3-5 раз на геном. В этих участках ДНК находятся структурные гены.

2 – фракция умеренных повторов 10²-10⁵ повторов. В этих участках находится информация о рРНК, тРНК, гистоновых белках.

3 – фракция множественных повторов до 10⁶. Эти участки ДНК называются сателлитной ДНК. Эти участки неинформативны, находятся в теломерных участках и около центромер. Участвуют в регуляции активности генов, в конъюгации хромосом при образовании бивалентов, и является спейсерными участками (разделяющими) между информативными участками ДНК.