Міністерство освіти і науки, молоді та спорту України

Львівський національний університет імені Івана Франка

Кафедра біохімії

Реферат на тему:

Матеріали і методи дослідження показників крові людей, хворих на туберкульоз

Виконала:

ст. гр. БЛБ – 61з

Костів Світлана

Перевірила:

доц. Стасик О. Г.

Львів 2013

План

1. Визначення кількості лейкоцитів.

2. Підрахунок лейкоцитарної формули.

3. Визначення концентрації гемоглобіну.

4. Колориметричний динітрофенілгідразиновий метод визначення активності амінотрансфераз в сироватці крові (за Ратманом-Френкелем).

1. Хід визначення активності аспартатамінотрансферази (АсАТ).

2. Хід визначення активності аланінамінотрансферази (АлАТ).

4. Визначення вмісту білірубіну та його фракцій в сироватці крові колориметричним діазометодом (за Йендрашіку, Клеггорну, Грофом ).

Матеріали і методи досліджень

1. Визначення кількості лейкоцитів

Для визначення кількості лейкоцитів в 1 л крові використовують метод підрахунку лейкоцитів в 1 мкл крові з оцтовою кислотою при постійному її розведенні і певному об'ємі лічильної камери Горяєва. Для цього кров засмоктуємо капіляром Панченкова, попередньо промитим 5% розчином цитрату натрію, до мітки «Р» і переносимо кров у лунку. Капіляром Салі набираємо кров із свіжої краплі до мітки 0,02 мл . Обтираємо носик капіляра ватним тампоном і вносимо кров у пробірку з реактивом – 3% розчином оцтової кислоти в кількості 0,4 мл, забарвленим метиленовою синькою. Оцтова кислота руйнує еритроцити, а метиленова синька забарвлює ядра лейкоцитів. Таким чином отримуємо розведення крові у 20 разів.

Чисте та сухе покривне скло притирають до камери так, щоб з’явилися кольорові кільця. Кров перемішують з реактивом Пастерівською піпеткою з балоном. Залишають на 3 хвилини, помішуючи. Кінцем круглої скляної палички відбирають краплю крові і наносять на край шліфованого скла. Після заповнення камери Горяєва її залишають на 1хв в спокої для осідання лейкоцитів. Розглядаємо під мікроскопом (15 х 40).

Підраховуються лейкоцити в 100 великих квадратах, що відповідають 1600 малих.

Результати підрахунку у великих квадратах додають і проводять розрахунок кількості лейкоцитів в 1 л крові за формулою:

х = а ×4000 × 20/b × 10⁶ , де

х – кількість лейкоцитів в 1 л крові;

а – кількість підрахованих лейкоцитів;

4000 – множник, що приводить результат до об’єму одного літра крові;

b – кількість лейкоцитів малих квадратів (100×16 = 1600).

2. Підрахунок лейкоцитарної формули

Лейкоцитарну формулу підраховують у зафарбованих мазках крові.

Мазок крові роблять на знежиреному предметному скельці без шліфованих граней. Для цього, справа, на відстані 1-1,5 см від короткого ребра наносять краплю крові. Правою рукою беруть предметне скло з шліфованими гранями і підводять його зліва до краплі крові так, щоб вона знаходилась під кутом 45˚. Коли крапля крові розпливеться на ширину скла, швидко і рівномірно переміщують його справа наліво вздовж знежиреного скла, не доходячи до краю 1 см. Виготовлений мазок висушують, фіксують 96° етиловим спиртом і фарбують фарбою Романовського - Гімзи, розведеною дистильованою водою у співвідношенні 1:3. Через 15-20 хвилин мазок промивають і висушують, а потім розглядають під мікроскопом з імерсійним об’єктивом. Для цього на одну з крайніх ділянок мазка наносять краплю кедрової (імерсійної) олії і опускають об’єктив (х90). Підрахунок лейкоцитів ведуть за ламаною лінією — меандром. На одній ділянці необхідно підрахувати 25 лейкоцитів. Всього на чотирьох ділянках слід підрахувати 100 лейкоцитів. Кожен лейкоцит заносять в таблицю, що складається з 100 квадратів: 10 по горизонталі й 10 по вертикалі. Для підрахунку форм лейкоцитів можна використати спеціальний лічильник СЛ-1.