1. Организационный момент ……………………………………….. 5 мин.

2. Разбор теории и практики по вопросам ………………………..10 мин.

1. Задачи хроматографического анализа.

2. Перечислите методы хроматографического разделения аминокислот.

3. Хроматографические методы анализа: принцип адсорбционной и распределительной хроматографии.

4. Как проводится радиальная хроматография на бумаге?

5. Какая цветная реакция лежит в основе хроматографии аминокислот на бумаге?

6. Гель – хроматография.

7. Тонкослойная хроматография.

3. Выполнение студентами лабораторной работы ………………….60 мин.

4. Анализ хроматограмм…………………………...………………….10 мин.

5. Задание на дом ……………………………………………………….5 мин.

Всего……… 90 минут

Хроматографические методы

Это физико-химические методы разделения смесей, основанные на их распределении между двумя несмешивающимися фазами, одна из которых является неподвижной, а другая подвижной.

Неподвижная фаза – поверхностно-активное твердое тело или жидкость, закрепленная на поверхности инертного твердого носителя.

Подвижная фаза – газ или жидкость, которые проходят через слой неподвижной фазы.

Метод был открыт в 1903 году Цветом М.С. Он впервые применил данный метод для разделения пигментов листьев растений.

Адсорбционная хроматография – процесс разделения основан на различии в относительном сродстве соединений к твердому адсорбенту (неподвижная фаза), а подвижной фазой служит жидкость (колоночная адсорбционная хроматография, тонкослойная хроматография).

Распределительная хроматография вещества предполагает распределение веществ между двумя жидкими фазами (жидкостная распределительная хроматография). В данном виде неподвижная фаза – хроматографическая бумага; тонкослойная хроматография (пластина из инертного материала, стекло, алюминиевая фольга) или колоночная хроматография (Al₂O₃) – разделение ионов Cu²⁺, Fe³⁺.

Ионообменная хроматография предполагает обратимый обмен ионов, содержащихся в растворе на подвижные ионы ионитов.

Гель-хроматография (метод молекулярных сит). Неподвижной фазой являются малоактивные материалы – гели (сефадексы G – 25, G – 50, G – 100) с заданной пористостью, способные удерживать молекулы вещества с определенными размерами и формой, разделять их по способности проникать в поры геля, т. е. по их способности к диффузии.

Гель-хроматография широко используется для фракционирования биополимеров – белков, очистки белков, концентрирования их.

Афинная хроматография – в ее основе лежит свойство высокомолекулярных и других биологически активных соединений «узнавать» в любой смести свои строго определенные вещества и взаимодействовать с ними … - антиген узнает свое антитело; гормон – свой рецептор, фермент – свой субстрат.

Задачи хроматографического анализа:

• разделение и идентификация нескольких компонентов в одном образце (смесь аминокислот);

• количественная оценка веществ;

• удаление веществ, мешающих анализу;

• концентрирование белков-ферментов;

• анализ токсических веществ в окружающей среде.

ТСХ (тонкослойная хроматография) является одним из наиболее простых и эффективных экспресс-методов разделения и анализа веществ в биосредах, пищевых продуктах, биоматериалах. Методы не требует сложного оборудования и обладает высокой избирательностью и чувствительностью.

Процесс разделения основан на различии в относительном сродстве компонентов смеси к неподвижной фазе – сорбенту и происходит в результате перемещения подвижной фазы – элюента под действием капиллярных сил по слою сорбента, нанесенного на хроматографическую пластину (алюминиевая фольга).

Скорость перемещения вещества является постоянной величиной Rf (коэффициент распределения).

Rf = J / L

J – фронт, пройденный исследуемым веществом (от линии старта до середины пятна);

L – фронт, пройденный растворителем.

LK

Фронт растворителя

jjjjjjLKK

Линия старта

Ассортимент сорбентов очень велик – силикагель, Al₂O₃, полиамиды, крахмал, гипс, агар-агар, СаSO₄, ZnCO₃.

Главное требование к сорбентам – отсутствие химического взаимодействия с анализируемым вещество.

Подвижная фаза – смесь растворителей разной полярности.

БУС; пропанол / Н₂О

Методы ТСХ позволяет медикам проводить определение токсинов, осуществлять диагностику отравлений, исследовать продукты метаболизма токсических веществ в биологических средах (кровь, слюна, моча, спинномозговая жидкость).