
- •Биохимия
- •Содержание
- •Введение
- •Техника безопасности в лаборатории биологической химии
- •Раздел 1 Белки
- •Лабораторная работа № 1 Простые белки. Цветные реакции на белки и аминокислоты.
- •Приготовление реактивов:
- •Опыт 1 Биуретовая реакция
- •Опыт 2 Нингидриновая реакция
- •Опыт 4 Реакция Миллона
- •Опыт 5 Реакция Сакагучи
- •Опыт 6 Реакция Адамкевича (на триптофан)
- •Опыт 7 Реакция Фоля
- •Опыт 8 Реакция на остаток аргинина (Сакагучи)
- •Опыт 9 Диазореакция
- •Опыт 10 Реакция на присутствие углеводных компонентов
- •Опыт 11 Реакция Вуазене (на триптофан)
- •Опыт 12 . Реакция Паули (на гистидин и тирозин)
- •Лабораторная работа № 2 Тема: Реакции осаждения белков
- •Необратимое осаждение белков.
- •Опыт 1 Осаждение белка кипячением
- •Опыт 2 Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
- •Опыт 3 Осаждение белков органическими кислотами
- •Опыт 5 Осаждение белков органическими растворителями.
- •Опыт 6 Осаждение белков реактивами на алкалоиды.
- •Обратимое осаждение белков Опыт 5 Обратимое осаждение белков.
- •Опыт 5 Альбумины и глобулины в природных белках
- •Опыт 7 Определение изоэлектрической точки белка
- •Лабораторная работа № 3 Тема: Сложные белки
- •Реакции на нуклеопротеиды
- •Приготовление гидролизата дрожжей
- •С гидролизатом проводят следующие реакции:
- •Реакции на фосфопротеиды.
- •Выделение казеиногена из молока
- •Доказательство белковой природы казеиногена
- •Реакции на гликопротеиды
- •Открытие углеводного компонента в яичном белке
- •Выделение муцина из слюны
- •Раздел 2 Ферменты
- •Лабораторная работа № 4 Ферментативный гидролиз крахмала
- •Лабораторная работа № 5 Тема: Свойства ферментов
- •Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов.
- •Лабораторная работа № 6 Протеолиз
- •Опыт 1 Определение активности протеиназ
- •Амилолитические ферменты
- •Опыт 2 Определение амилазной активности слюны
- •Опыт 3 Определение амилазной активности мочи
- •Окислительно-восстановительные процессы
- •Опыт 3 Качественная реакция на каталазу
- •Опыт 4 Качественные реакции на дегидрогеназы
- •Опыт 5 Открытие липазы
- •Опыт 7 Количественное определение активности ферментов
- •Раздел 3 Витамины
- •Лабораторная работа № 7 Тема: Открытие витаминов
- •Опыт 1 Водорастворимые витамины
- •Открытие аскорбиновой кислоты в шиповнике
- •Обнаружение аскорбиновой кислоты в соке картофеля или капусты
- •Количественное определение аскорбиновой кислоты в моче
- •Примечание. Данную работу можно рекомендовать на группу в 3-4 учащихся. Причем экстракция чая делается одна на группу, а титрование и расчет производит каждый Опыт 2 Жирорастворимые витамины
- •Открытие ретинола (витамина а) в рыбьем жире
- •Открытие токоферола (витамин е)
- •Раздел 4 Углеводы Лабораторная работа № 8 Тема: Открытие углеводов
- •Открытие крахмала
- •Тема: Свойства углеводов
- •Раздел 5 Липиды Лабораторная работа № 9 Тема: Открытие липидов (жиров)
- •Опыт 1 Растворимость жиров и масел
- •Опыт 2 Гидролиз жиров и масел
- •Опыт 3 Выделение жира из молока
- •Опыт 4 Обнаружение глицерина в жирах (акролеиновая проба)
- •Опыт 5 Определение ненасыщенности кислот в составе жира
- •Опыт 6 Определение йодного числа
- •Опыт 7 Определение кислотного числа
- •Опыт 8 Омыление жиров
- •Опыт 9 Определение числа омыления
- •Раздел 6 Взаимосвязь обмена веществ и энергии
- •Задания теста:
- •Конечные продукты метаболизма:
- •4 Распад
- •Реакции цикла Кребса
- •Лабораторная работа № 1 Тема: Обмен простых белков
- •Хроматографический метод определения аминокислот. Разделение смеси аминокислот с помощью радиальной хроматографии
- •Лабораторная работа № 2 Обмен сложных белков
- •Обмен нуклеопротеидов
- •Обмен хромопротеидов
- •Открытие билирубина
- •Реакции на желчные пигменты
- •Лабораторная работа №3 Переваривание белка Опыт 1 Действие желудочного сока на белки
- •Опыт 2 Переваривание белка пепсином
- •Опыт 3 Переваривание белка трипсином
- •3.1 Переваривание фибрина
- •3.2 Переваривание казеина
- •3.3 Выделение триметиламинооксида
- •Практическая работа: Белки Задание № 1
- •Задание № 2
- •Задание № 3
- •Лабораторная работа № 4 Тема: Обмен углеводов
- •Опыт 1 Переваривание углеводов в пищеварительном тракте
- •Лабораторная работа №5 Обмен липидов
- •Опыт 1 Качественная реакция на желчные кислоты.
- •Опыт 2 Действие фосфолипаз поджелудочной железы.
- •Опыт 3 Эмульгирование жира
- •Опыт 4 Проба на понижение поверхностного натяжения
- •Опыт 5 Реакции на ацетоновые тела а) Реакция на образование йодоформа
- •Б) Реакция с нитропруссидом натрия
- •В) Реакция на ацетоуксусную кислоту
- •Лабораторная работа № 6 Переваривание жиров
- •Практическая работа: Обмен липидов Решение тестовых заданий
- •Лабораторная работа № 7 Водный и минеральный обмен
- •Открытие хлоридов
- •Открытие сульфатов
- •Открытие фосфатов
- •Вопросы к зачету по биохимии
- •Вопросы к экзамену по биохимии
- •Проверка и контроль знаний по биохимии
- •1 Химия белков и аминокислот
- •2 Химия нуклеиновых кислот
- •Как называются входящие в состав нуклеиновых кислот гетероциклические основания?
- •3 Химия углеводов
- •4 Химия жиров и липидов
- •5 Витамины
- •6 Ферменты
- •7 Обмен веществ и энергии
- •8 Обмен липидов
- •9 Обмен белков
- •11 Водный и минеральный обмен
- •12 Задания на повторение темы « Обмен энергии»
- •13 Задания на повторение темы « Обмен углеводов»
- •Темы курсовых работ по биохимии
- •Задачи по биохимии
- •Примеры тестовых заданий
- •Рекомендуемая литература
Раздел 3 Витамины
Витаминами называются органические вещества разнообразной химической природы, которые необходимы в малых дозах для нормального обмена веществ и жизнедеятельности животного и человеческого организма
Витамины образуются, главным образом, в растениях. Животные и человек, получают их с пищей в готовом виде или в виде провитаминов, из которых затем образуются витамины. Витамины необходимы также для нормального роста и развития растений и микроорганизмов.
Витамины разделяются на водорастворимые и жирорастворимые. Водорастворимые витамины в пищевых продуктах могут быть обнаружены по ряду качественных реакций.
Лабораторная работа № 7 Тема: Открытие витаминов
Цель занятия: научиться определять витамины, изучить их качественные реакции.
Оборудование и реактивы: 1% раствор сульфаниловой кислоты, 5% раствор нитрата натрия, порошок тиамина, 10% раствор бикарбоната натрия, 0,025% раствор рибофлавина, концентрированная соляная кислота, металлический цинк, 0,01 г никотиновой кислоты, 10 % раствор уксусной кислоты, 5% раствор ацетата меди, 10% раствор тиомочевины, витамин В12 беззольный фильтр, концентрированная серная кислота, пробка с обратным холодильником, штатив, дистиллированная вода, 5% раствор пиридоксина, 5% раствор хлорного железа, аскорбиновая кислота, 5% раствор феррицианида калия, концентрированная уксусная кислота, 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофенол, 0,1 г чая, индигокармин, 0,05 н. раствор перманганата калия.
По своей химической природе витамины представляют собой низкомолякулярные вещества различного строения. Они являются незаменимыми факторами питания, так как большая часть из них в организме не синтезируется. Биологическое значение витаминов заключается в том, что они входят в состав ферментов, катализирующих все биохимические превращения в организме.
Опыт 1 Водорастворимые витамины
К водорастворимым ферментам относятся витамины группы В, а также витамин С, Р и другие витаминоподобные вещества.
Качественная реакция на тиамин (витамин В1). В основе реакции лежит способность витамина в щелочной среде с диазореактивом образовывать окрашенное комплексное соединение.
Ход работы. В пробирку приливают по 5-10 капель 1% раствора сульфаниловой кислоты и 5% раствора нитрата натрия (состав диазореактива). Сюда же вносят на кончике ножа или стеклянной палочки небольшое количество порошка тиамина и по стенке пробирки осторожно добавляют 5-7 капель 10% раствора бикарбоната натрия. На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.
Диазореакция. В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное соединение оранжевого цвета.
Ход работы: к диазореактиву, содержащему 5 капель 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты и 5 капель 5%-ного раствора нитрата натрия, добавляют 1-2 капли 5%-ного раствора тиамина и затем по стенке, наклонив пробирку, осторожно добавляют 5-7 капель10%-ного бикарбоната натрия. На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.
Открытие рибофлавина (витамин В2). Реакция основана на способности витамина легко восстанавливаться, что сопровождается изменением окраски раствора из желтой в розовый с дальнейшем обесцвечиванием.
Ход работы. В пробирку приливают 10 капель 0,025% раствора рибофлавина, 5 капель концентрированной соляной кислоты и зернышко металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с витамином, восстанавливая его, и раствор меняет окраску (из желтого на красную и розовую), а затем обесцвечивается.
Открытие никотиновой кислоты (витамина РР). Никотиновая кислота при нагревании с раствором ацетата меди образует синий осадок плохо растворимой медной соли.
Ход работы. В пробирку вносят 0,01 г никотиновой кислоты и 20 капель 10 % раствора уксусной кислоты. Нагревают до кипения и добавляют равный объем 5% раствора ацетата меди. При постепенном охлаждении раствора выпадает синий осадок меди комплексной соли и никотиновой кислоты.
Открытие цианкобаламина ( витамина В12). Данная реакция основана на способности кобальта, входящего в состав витамина, взаимодействовать с тиомочевиной с образованием при нагревании роданистого кобальта зеленого цвета.
Ход работы. На беззольный фильтр наносят 2-3 капли 10% раствора тиомочевины и высушивают над сеткой газовой горелки. Затем на фильтр добавляют 1-2 капли минерализата витамина. Приготовление минерализата: в пробирку вносят содержимое одной ампулы витамина В12 и 3-5 капель концентрированной серной кислоты, закрывают ее пробкой с обратным холодильником, закрепляют на штативе в несколько наклоненном положении и производят сжигание в вытяжном шкафу до обесцвечивания раствора. По окончании минерализации добавляют 1 мл дистиллированной воды небольшими порциями при постоянном перемешивании и вновь подсушивают. На фильтре (чаще по краям пятна) появляется зеленое окрашивание.
Открытие пиридоксина (витаминов В6). При взаимодействии витамина с хлорным железом образуется соединение красного цвета за счет возникновения комплексной соли типа фенолята железа.
Ход работы. В пробирке смешивают 5 капель 5% раствора пиридоксина и 1 каплю 5% раствора хлорного железа и встряхивают. Смесь окрашивается в красный цвет.