«Виділення та якісне визначення складу глюкопротеїнів, фосфопротеїнів»

Мета заняття: вивчити, з яких компонентів складаються складні білки.

План заняття

1. Вивчити склад глюкопротеїнів.

2. Вивчити фосфопротеїни молока.

1. Дослідження складу глюкопротеїнів

Глюкопротеїни містять як простетичну групу вуглеводу або їх похідні, а також залишки сірчаної або оцтової кислоти. Деякі з глюкопротеїнів мають велику в’язкість і називаються мукополісахаридами (mucos – слиз).

Одним із видів мукополісахаридів є муцин, який входить до складу слини, інших травних соків, слизів, що покривають поверхню шлунково-кишкового тракту. Ці слизові протеїни обволікають тверді частинки їжі і завдяки цьому захищають стінки травного тракту від пошкоджень.

В муцині, що виділяється зі слини, визначають наявність пептидних зв’язків за допомогою біуретової реакції і вуглеводу використовуючи α-нафтол (реакція Подобєдова). Реакція відбувається в концентрованій сірчаній кислоті, де з моносахаридів, що входять у муцин, утворюється оксиметилфурфурол. Він конденсується з α-нафтолом, утворюючи сполуку фіолетового кольору.

Об’єкт дослідження: Слина (джерело глюкопротеїнів).

Обладнання і посуд: 1. Штатив із пробірками;

2. Скляна паличка;

3. Нагрівальний прилад;

4. Крапельниці.

Реактиви: 1. Оцтова кислота, (концентрована);

2. Гідрооксид натрію, 1%-й розчин;

3. Сірчанокисла мідь, 5%-й розчин;

4. Сірчана кислота концентрована;

5. ά-нафтол, 0,2%-й розчин в етиловому спирті.

Техніка виконання роботи

А. Виділення муцину зі слини

Слину збирають у пробірку, потім додають розчин оцтової кислоти до появи згустку муцину. Згусток притискають до стінки пробірки скляною паличкою та промивають водою.

Б. Виявлення пептидів у муцині

Згустки муцину кладуть у пробірку і проводять біуретову реакцію: додають 1...2 мл NaOH та 1…5 крапель CuSO₄. Відзначають зміну забарвлення.

В. Виділення вуглеводів з муцину

У пробірку кладуть згусток муцину, додають 5...6 крапель α-нафтолу, змішують і обережно по стінці доливають 1...2 мл концентрованої сірчаної кислоти. Спостерігають зміни забарвлення на межі двох шарів.

2.Вивчення складу фосфопротеїнів молока

Об’єкт дослідження: Молоко.

Обладнання і посуд: 1. Штатив із пробірками;

2. Паперові фільтри.

3. Воронки;

4. Скляна паличка або лопатка

Реактиви: 1. Оцтова кислота, 10%-й розчин;

2. NaOH, 1%-й розчин;

3. CuSO₄, 5%-й розчин;

4. СН₃СООН, 10%-й розчин;

5. Молібденовий реактив.

6. Дистильована вода.

Техніка виконання роботи

А. Виділення казеїну з молока

У пробірку наливають 3 мл молока, додають 1 мл дистильованої води і по краплинах 10 %-й розчин оцтової кислоти (уникати надлишку кислоти!). Випадає осад, який отфільтровують, декілька разів промивають дистильованою водою, знімають з фільтру у пробірку скляною паличкою або лопаткою.

Б. Вивчення складу фосфопротеїнів молока

Осад казеїну у пробірці розчиняють в 1 %-му розчині NaOH. Для цього до осаду додають 1…2 мл 1 %-го NaOH. Кип’ятять 1...2 хвилини. Охолоджують. При кип’ятінні у лужному середовищі відбувається частковий гідроліз фосфопротеїнів. Розчин фільтрують через бумажний фільтр. Гідролізат (фільтрат) використовують для проведення біуретової реакції і проби на фосфорну кислоту з молібденовим реактивом за методиками, які наведено раніше.

.

Контрольні запитання

1. Як відбувається розщеплення білків у шлунково-кишковому тракті ?

2. Охарактеризуйте ферменти, що беруть участь у переварюванні білків.

3. Які отруйні речовини утворюються в товстій кишці ?

4. Як відбувається знешкодження отруйних речовин у печінці ?

5. Яким перетворенням піддаються амінокислоти в тканинах ?

6. Розповісти, як і де утворюються біологічно активні аміни.

7. Назвіть кінцеві продукти білкового обміну, що містяться в тканинах.

8. Як відбувається знешкодження аміаку?

9. Як відбувається обмін нуклеїнових кислот в організмі ?

10. Які порушення пуринового обміну бувають в організмі людини ?

11. Напишіть, як утворюється сечова кислота.

12. У яких харчових продуктах містяться нуклеїнові кислоти ?