41. Разобщение дыхания и фосфорилирования

Убедительные экспериментальные доказательства в пользу описанного механизма сопряжения дыхания и фосфорилирования были получены с помощью ионофоров. Молекулы этих веществ, как правило, липофильны и способны переносить ионы через мембрану. Например, 2,4-динитрофенол (протонофор) легко диффундирует через мембрану, в ионизированной и неионизированной форме, перенося протоны в сторону их меньшей концентрации в обход протонных каналов. Таким образом, 2,4-динитрофенол уничтожает электрохимический потенциал, и синтез АТР становится невозможным, хотя окисление субстратов при этом происходит. Энергия дыхательной цепи в этом случае полностью рассеивается в виде теплоты. Этим объясняется пирогенное действие разобщителей. Разобщающим действием обладают гормон щитовидной железы - тироксин, а также некоторые антибиотики, такие как валиномицин и грамицидин.

42. Ингибиторы цепи транспорта электронов и окислительного фосфорилирования Ингибиторы, блокирующие дыхательную цепь, действуют в определенных местах, препятствуя работе дыхательных ферментов. Ротенон блокируют перенос электронов на участке до цитохрома b, действуя предположительно на НАД(Ф)-H₂-дегидрогеназу. Антимицин А (антибиотик, продуцируемый Streptomyces) подавляет перенос электронов от цитохрома b к цитохрому c₁. Цианид, окись углерода и азид блокируют конечный этап переноса электронов от цитохромов a + a₃ на молекулярный кислород, ингибируя цитохромоксидазу. Если блокировать перенос электронов в электронтранспортной цепи определенными ингибиторами, то переносчики, находящиеся на участке от субстрата до места действия ингибитора, будут в восстановленной, а переносчики за местом действия ингибитора - в окисленной форме

43. Регуляция энергетического обмена

Синтез АТР в клетке регулируется потребнос­тью в энергии, что достигается согласованной ре­гуляцией скоростей реакций ЦПЭ и ОПК.

Увеличение концентрации ADP ускоряет окис­ление NADH в ЦПЭ, что приводит к увеличению скорости реакций, катализируемых регуляторными НАД⁺ - зависимыми ферментами, и к увеличению скорости общего пути катаболизма в целом (рис. 9). Кроме этого, ADP аллостерически акти­вирует регуляторные ферменты ОПК. Такая согласо­ванная регуляция ЦПЭ и ОПК приводит к тому, что вместо использованных молекул АТР синтезируется адекватное количество новых; чем больше использо­вано АТР, тем больше его синтезируется.

Скорость ОПК регулируется на уровне 4 реак­ций, катализируемых:

пируватдегидрогеназным комплексом;

цитратсинтазой;

изоцитратдегидрогеназой;

-кетоглутаратдегидрогеназным комплексом.

Регуляцию скорости ОПК осуществляя сколько механизмов:

1. аллостерическая регуляция - каждый регуляторный фермент имеет аллостерические эффекторы, концентрация кои изменяется в зависимости от состояния клетки;

2.увеличение активности фермента при высоких концентрации субстрата (например, пируват наиболее эффективный активатор пируватгидрогеназного комплекса);

3.ингибирование фермента продуктами peaкции: пируватдегидрогеназный комплекс инибируется ацетил-КоА и НАДН, цитратсинтаза - цитратом;

4. фосфорилирование и дефосфорилирование ПДК (рис.9).

Наиболее сложна регуляция ПДК. Реакция, катализируемая ПДК, связывает между co6oй такие метаболические пути, как гликолиз (распад глюкозы), глюконеогенез (синтез глюкозы), синтез жирных кислот, окисление жирных кислот и цикл Кребса. Можно сказать, что реакции, катализируемые ПДК, представляют собой большой биохимический перекресток. В составе ПДК содержатся 2 регуляторные субъединицы: киназа и фосфатаза. Киназа фосфорилирует ПДК и переводит его в неактивную форму, фосфатаза отщепляет фосфорный остаток от ПДК и переводит его в активную форму. Киназа ПДК аллостерически активируется АТФ, НАДН и ацетил-КоА, а ингибируется пируватом, АДФ, НАД, HSKoA, Са²⁺ (рис.10).

Киназа ПДК аллостерически активируется НАДН, ацетил-КоА и АТФ, следовательно, при их накоплении прекращается дальнейшее превра­щение пирувата в ацетил-КоА. Такая ситуация создается, например, в печени при голодании: из жировых депо в печень поступают жирные кис­лоты, в митохондриях в результате специфического пути их катаболизма накапли­вается большое количество ацетил-КоА и НАДН. Пируват при этом не окисляется и может быть использован для синтеза глюкозы (глюконеогенеза).

Киназа ПДК аллостерически иигибируется пируватом, AДФ, HSKoA, Са²⁺. В абсорбцион­ный период глюкоза поступает в клетки и распа­дается с образованием пирувата. Высокая кон­центрация пирувата действует на ПДК двумя способами:

• поддерживает ПДК в нефосфорилированной активной форме, так как это наиболее сильный ингибитор киназы ПДК;

• аллостерически активирует нефосфорилированную активную форму ПДК, действуя согласованно с другими активаторами - субстратами реакций - НАД⁺ и HSKoA. В результате создаются условия для образо­вания ацетил-КоА из глюкозы. Ацетил-КоА может окисляться в ЦТК; в печени и жировой ткани часть ацетил-КоА исполь­зуется для синтеза жирных кислот.

Регуляция ионами Ca²⁺ особенно важна в мыш­цах. Потенциал действия увеличивает концентра­цию Ca²⁺ в митохондриях, что одновременно ингибирует киназу и активирует фосфатазу; это быстро переводит ПДК в активную нефосфорилированную форму. Одновременно Са²⁺ активи­рует регуляторные ферменты ЦТК, и ацетил-КоА быстро окисляется, обеспечивая синтез АТР для работы мышц.