• На жидких средах – равномерное помутнение, пристеночное кольцо, незначительный осадок;

• На плотных средах – мелкие, прозрачные с ровным краем колонии.

• 19. Эпидемиология бруцеллеза.

• Резервуар и источник инфекции – домашние животные (овцы, козы, коровы, свиньи, реже собаки). Человек – вторичный хозяин, заболевания людей возникают на фоне эпизоотий.

• Наиболее патогенной для человека в нашей стране считается B.melitensis. Она является причиной заболевания людей более чем в 95-97% всех случаев бруцеллеза. B.abortus, как правило, вызывает латентную форму болезни, и только в 1-3% отмечаются клинические проявления. Еще реже заболевание вызывает B.suis (менее 1%).

• Бактерии передаются от животного к животному и человеку через контакт с зараженными фекалиями, мочой, молоком и мясом.

• У животных бруцеллез протекает в виде общего заболевания, картина которого бывает различной. Для крупного и мелкого рогатого скота наиболее характерны проявления болезни – инфекционные аборты, особенно если они носят массовый характер. У свиней аборты отмечаются реже, болезнь протекает как хронический сепсис с поражением суставов и других органов. От больных животных бруцеллы выделяются с молоком, мочой, испражнениями, гноем и особенно обильно – в период выкидыша с плодом, последом и истечениями из родовых путей. Обильное размножение бруцелл в оболочках плода связывают с наличием в них многоатомного спирта – эритритола, который служит важным фактором роста бруцелл.

• Человек заражается от животных главным образом контактным или контактно-бытовым путем (80-90% всех заболеваний). Алиментарный способ заражения наблюдается при употреблении непастеризованного молока от инфицированных животных или молочных продуктов из него, а также воды. Контактным или контактно-бытовым путем могут заразиться все лица, постоянно или временно имеющие дело с животными или сырьем животного происхождения в силу своей профессии (пастухи, скотники, доярки, ветеринарные работники). Особенно опасен период окота, отела (март – май). Бруцеллы при этом проникают в организм человека через кожу или, значительно чаще, через слизистые оболочки полости рта, носа, глаз.

• 20. Почему бруцеллез – особо опасная инфекция?

• 21. Патогенез бруцеллеза.

• Входными воротами при бруцеллезе служат кожа и слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта. Бруцеллы, как и возбудители чумы и тулеремии, могут проникать даже через неповрежденную кожу.

• Из места входных ворот бруцеллы по лимфатическим путям попадают в региональные лимфатические узлы (чаще всего это лимфатический аппарат ротовой полости, заглоточные, шейные, подчелюстные железы и лимфатический аппарат кишечника). Такие лимфоузлы превращаются в своеобразные “депо” бруцелл.

• Из лимфатических узлов возбудитель проникает в кровь и распространяется по всему организму, избирательно поражая ткани лимфо-гемопоэтической системы. При этом часть бруцелл погибает, освобождая эндотоксин. Происходит сенсибилизация организма и формирование гиперчувствительности замедленного типа.

• В дальнейшем наблюдается многократная генерализация про-цесса, что определяет течение болезни по типу хрониосепсиса с упорной наклонностью к рецидивам и выраженной аллергизацией организма.

• Примерно к двадцатому дню болезни в лимфатических образованиях, печени, селезенке, костном мозге и других участках ретикулоэндотелиальной системы образуются гранулемы – узелки, состоящие из эпителиоидных и гигантских клеток с зоной некроза и фиброзом по периферии органов. Гранулемы в последствии могут привести к абсцессу. В таких очагах бруцеллы располагаются преимущественно внутриклеточно. Иногда развиваются остеомиелит, менингит, холецистит.

• Инкубационный период при бруцеллезе 1-6 недель. Начало заболевания постепенное: появляются слабость, недомогание, лихорадка, потливость. Обычно температура повышается во второй половине дня; падение температуры в ночное время сопровождается обильным потоотделением. Лихорадка длительная, сохраняющаяся месяцами. Общее состояние больных даже в период высокой температуры относительно хорошее (не соответствует объективным данным).

• Клинические проявления бруцеллеза многообразны и зависят от того, какие органы и ткани вовлечены в инфекционный процесс. Чаще всего страдают лимфатическая, сосудистая, гепатолиенальная, нервная и особенно опорно-двигательная системы.

• Наблюдается увеличение лимфатических узлов и селезенки. Гепатит может сопровождаться развитием желтухи. Боли и рас-стройства движения, особенно в позвоночнике, указывают на раз-витие остеомиелита. Эти симптомы генерализованной бруцеллезной инфекции стихают в течение нескольких недель или месяцев, хотя локализованные поражения могут сохраняться очень долго.

• После острой фазы может развиться хроническая стадия, ха-рактеризующаяся слабостью, острыми и ноющими болями, субфебрильной температурой, раздражительностью, невротическим состоянием.

• Могут поражаться генеративные органы, наблюдаться прерывание беременности.

• Летальность при бруцеллезе колеблется от 1 до 6 процентов. Прогноз для жизни обычно благоприятный, но значительная про-должительность болезни, обилие осложнений нередко приводят к утрате трудоспособности и стойкой инвалидности.

• 22. Микробиологическая диагностика бруцеллеза.

• Материалом для исследования при бруцеллезе у больных людей являются кровь (в некоторых случаях костный мозг), моча, грудное молоко, мокрота, спинномозговая жидкость и т.д.

• Применяется бактериологический метод; первоначально исследуют кровь. Пробу крови засевают в объеме 5-10 мл в два флакона, содержащих по 50-100 мл бульона. Один из флаконов инкубируют в условиях с повышенным содержанием СО2 (для выделения B.abortus), другой – в обычных условиях. Посевы выдерживают в термостате при 37°С не менее месяца.

• Если исследуемый материал загрязнен, единственным надеж-ным методом исследования является биологический: заражение бе-лых мышей или морских свинок и последующее выделение бруцелл из органов зараженных животных.

• Бактериологический и биологический методы могут приме-няться лишь в лабораториях особо опасных инфекций.

• Наиболее применяемыми методами в широкой медицинской практике являются серологические исследования. Используют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона), развернутую реакцию агглютинации (реакция Райта), РНГА, РСК, люминесцентно-серологический метод, иммуноферментный метод и т.д.

• При отрицательных результатах бактериологического и серо-логических исследований применяют кожную аллергическую пробу (проба Бюрне). Проба Бюрне обычно становится положительной к концу первого месяца заболевания у 70-85% пациентов. В качестве антигена применяют бруцеллин – протеиновый экстракт культуры бруцелл.

• 23. Методы мб диагностики бруцеллеза. Наверное тоже самое, что и в 22 вопросе.

• 24. Серодиагностика бруцеллеза.

• Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруцеллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресценции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).

• 25.Антиглобулиновая проба (реакция Кумбса) В диагностике бруцеллеза у людей и животных, особенно при хроническом течении инфекции, когда реакция агглютинации может быть отрицательной или положительной в низких титрах, важное место следует отвести выявлению неполных антител. При постановке реакции Кумбса используют предварительно оттитрованную антиглобулиновую сыворотку против глобулинов человека (например - антиглобулиновая сыворотка для иммуноэлектрофореза против глобулинов человека) (см. схему титрации). Техника постановки реакции Кумбса (РК). В начале ставят реакцию агглютинации (Райта). После учета реакции агглютинации (через 20 часов) берут не менее трех пробирок первых разведений при отрицательном результате реакции агглютинации или не менее трех пробирок, начиная со слабоположительного результата (+, ++). Эти пробирки центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 20 минут для осаждения антигена. Надосадочную жидкость осторожно отсасывают с помощью пастеровской пипетки и отбрасывают, затем в каждую пробирку наливают по 1 мл физиологического раствора, тщательно встряхивают и снова центрифугируют, таким образом осадок промывают три раза. После последнего центрифугирования к осадку отмытого антигена добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки в рабочем титре, пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат на 18 - 20 часов. Учет реакции проводят так же, как при реакции агглютинации. Диагностическим титром РК считается агглютинация не менее 2+ в разведении сыворотки 1:50. Для контроля антиглобулиновой сыворотки взять в опыт сыворотку, содержащую неполные антитела с известным титром. Контроль антигена. Взвесь антигена в физиологическом растворе подвергается отмыванию центрифугированием, как в основной реакции, после чего добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки. При учете в контроле антигена наблюдается равномерное помутнение. Схема титрования антиглобулиновой сыворотки для РК. Для титрования антиглобулиновой сыворотки (против глобулинов человека) необходимо иметь сыворотку крови человека, заведомо содержащую неполные антитела к бруцеллам в высоком титре. Титрование антиглобулиновой сыворотки производят следующим образом. Вначале титруют положительную бруцеллезную сыворотку в реакции агглютинации (Райта). При этом делают несколько рядов разведений сыворотки, приблизительно - 8 рядов

  18

27.5.2.1. Пластинчатая реакция агглютинации (реакция Хеддлсона) Преимущество этого метода заключается в простоте постановки реакции, быстром получении результатов и чувствительности реакции. В качестве антигена для постановки реакции Хеддлсона и Райта применяют единый бруцеллезный диагностикум. Реакцию ставят на обычном оконном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле, расчерченном на квадраты величиной 4 x 4 см каждый, по горизонтали должно быть 5 квадратов. На первом квадрате с левой стороны записывается номер испытуемой сыворотки, в последующие квадраты слева направо разливают (микропипеткой или 1 мл градуированной пипеткой) испытуемую сыворотку в следующих дозах: 0,04, 0,02, 0,01 и 0,03 (контроль сыворотки). К первым трем дозам сыворотки добавляют по 0,03 мл антигена. К последней дозе сыворотки (0,03) добавляют 0,03 мл физиологического раствора. Сыворотку осторожно смешивают с антигеном палочкой, начиная с минимальной дозы сыворотки. Контроль антигена ставят, добавляя 0,03 мл физиологического раствора к 0,03 мл антигена. Затем стекло слегка подогревают над пламенем спиртовки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла. В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья (агглютинат). Максимальный срок наблюдения 8 минут: а) контроль сыворотки ставят с каждой испытуемой сывороткой для исключения спонтанной агглютинации; б) контроль антигена ставят один (при любом числе испытуемых сывороток) для исключения спонтанной агглютинации применяемого антигена. Учет реакции проводят невооруженным глазом по следующей схеме: а) полное просветление жидкости с крупными и мелкими хлопьями, т.е. 100% агглютинации (4+); б) почти полное просветление жидкости с ясно заметными хлопьями, т.е. 75% агглютинации (3+); в) незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями, т.е. 50% агглютинации (2+); г) мутная жидкость с едва заметной зернистостью (+); д) равномерная мутная жидкость (-). Для оценки результатов рекомендуется следующая схема: а) агглютинация на 4+ во всех дозах сыворотки - результат "резко положительный"; б) агглютинация не менее 2+ во всех дозах сыворотки - результат "положительный"; в) агглютинация только в первой или в первой и второй дозах сыворотки - результат "сомнительный"; г) отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки - реакция "отрицательная". Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный результат реакции. При сомнительном или отрицательном результатах реакции и наличии эпидемических и эпизоотических показаний, а также в стационаре и при обследовании доноров, где необходимо определение титра агглютининов и их динамики, следует применять реакции Райта и Кумбса, РПГА и ИФА. 5.2.2. Реакция агглютинации в пробирках (реакция Райта) Реакция агглютинации является одним из основных методов диагностики бруцеллеза у людей. Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза. Техника постановки реакции. В пробирки разливают физиологический раствор: в первую - 2,4 мл, в остальные по 0,5 мл. В первую пробирку добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, переносят 0,5 мл в третью пробирку и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл смеси выливают, в результате получают в каждой пробирке по 0,5 мл следующих разведений 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. Из первой пробирки 0,5 мл переносят в чистую пробирку и добавляют туда 0,5 мл физиологического раствора (контроль сыворотки в разведении 1:50), а 1,0 мл выливают. Диагностикум разводят физиологическим раствором согласно прилагаемому к нему наставлению и добавляют по 0,5 мл во все пробирки, кроме контроля. После добавления диагностикума разведение сыворотки соответственно удваивается, т.е. получается 1:50, 1:100 и т.д. Сыворотки с антигеном смешивают путем встряхивания и помещают в термостат (37 °C ) на 18 - 20 часов. После инкубации пробирки выдерживают 1 - 2 часа при комнатной температуре и проводят учет реакции. Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости.

37. Методы МБ диагностики сибирской язвы (тут, наверное, нужно просто перечислить)

Материал:

• кожная форма - содержимое пузырьков из карбункула/язвы

• кишечная ф. – испражнения, моча

• лёгочная ф. - мокрота

• септическая ф. – кровь

Методы:

Бактериоскопический – обнаружение Г+ палочек, окруженных капсулой (материал из живого организма), или спор (окр. среда)

Бактериологический (основной) – выделение чистой культуры и её идентификация с проверкой на патогенность для лаб. животных. Материал сеют на МПБ, чашки с МПА и кровяным агаром. Посевы инкубируют при t=70 С 18-20ч. В бульоне – рост в виде пучка ваты, при микроскопии – типичное расположение в виде длинных цепочек. На МПА вырастают крупные шероховатые матовые R-формы колоний с неровными, волокнистыми краями («львиная грива»). На кровяном агаре колонии имеют S- или SM-форму (SM - гладкие, блестящие, слизистые,  с неровными краями) без гемолиза, но с большой зоной просветления среды(?). Тест «жемчужного ожерелья»: бульон Хоттингера с лошадиной сывороткой + пенициллин, сеют, через 3 ч. в термостате делают мазки, окрашивают метиленовым синим, микроскопируют. Бациллы располагаются в виде цепочек из шаровидных форм, напоминающие бусы жемчуга.

Биологический (делают параллельно с бактериологическим) - в случаях, когда исслед. материал загрязнен сопутствующей, особенно гнилостной, микрофлорой, исп-ют биологическую пробу: подкожное заражение белых мышей/морских свинок. При наличии b.anthracis мыши гибнут через 24-26ч., кролики – ч. 2-3сут. У них наблюдаются явления общего сепсиса, увеличенная селезенка, инфильтрат в месте введения материала. В препаратах-мазках из крови/органов обнаруживаются капсульные палочки.

Серологический – проводится редко. Выявляют антитела в сыворотке крови с использованием РНГА, ИФА, реакция коагглютинации.

Аллергический метод – проба антраксином. «+» - если через 48ч. гиперемия и диаметр более 15мм.