6.7 Тонкослойная хроматография

Тонкослойная хроматография (ТСХ) представляет собой одну из разновидностей адсорбционной хроматографии. Она широко используется в органической химии для идентификации соединений и установления их чистоты, а также иногда в препаративных целях.

6.8.Жидкостная хроматография.

В этом случае неподвижной фазой служит жидкость. Наиболее распространенным случаем является адсорбционный вариант жидкостной колоночной хроматографии. Пример разделения природных пигментов представлен на рис.4.

Рис.4. Хроматографическое разделение природных пигментов (флавонов и изофлавонов)

Разделение веществ по методу ТСХ происходит на «открытых» колонках, т.е. в тонком слое адсорбента, нанесенного на стеклянную пластинку. В качестве твердой фазы обычно используется силикагель, оксид алюминия, целлюлоза.

Адсорбент наносят на пластину двумя способами – «сухим» и «мокрым». В первом случае получают хроматографическую пластинку с незакрепленным слоем адсорбента, во втором - с закрепленным. При «сухом» способе адсорбент насыпается на стеклянную пластинку и разравнивается специальным стальным валиком, позволяющим получить однородный ровный по всей площади пластины слой адсорбента толщиной 0,5 -1 мм. При «мокром» способе в адсорбент предварительно добавляют фиксатор (гипс, крахмал и т.п.), На поверхность пластинки наносят сорбционную массу в виде суспензии из сорбента, фиксатора и воды, выравнивают ее на поверхности пластинки. Затем сушат пластинки на воздухе при комнатной температуре при 15 - 20 мин и активируют, нагревая в сушильном шкафу или выдерживая 24 ч на воздухе при 20^°С. После сушки слой адсорбента оказывается связанным с поверхностью пластинки, что значительно облегчает работу с ней.

6.9. Гель-фильтрационная, или молекулярно-ситовая, хроматография.

Принцип разделения в таких системах несколько иной, чем в предыдущих случаях. Неподвижной фазой являются материалы, обычно гели, со строго контролируемой пористостью, в результате чего одни компоненты смеси в соответствии с размером и формой молекул могут проникать между частицами геля, а другие не могут. Наиболее часто этот вид хроматографии используется для разделения высокомолекулярных соединений. Один из вариантов применения этого метода – определение молекулярных масс разделяемых веществ, часто необходимых для химических исследований (рис.5).

Рис. 5. Схема разделения методом гель-хроматографии: а – начало разделения, б – разделение, в – конец разделения; большие кружки – частицы геля, большие точки – молекулы соединений с большой молекулярной массой, маленькие точки – молекулы соединений с меньшей молекулярной массой

6.10. Аффинная хроматография.

Этот вид хроматографии основан на взаимодействии между веществом, с одной стороны, способным реагировать с выделяемым соединением, а с другой – связанным с твердым носителем неподвижной фазы. Такое вещество обладает сродством к выделяемому соединению и называется аффинным лигандом. Наиболее часто этот метод находит применение в биохимическом анализе. Число способов хроматографирования не ограничивается перечисленными выше. Часто хроматографию сочетают с другими физико-химическими методами, например с масс-спектрометрией.

ЛЕКЦИЯ 4.