Ход работы:

Определение соотношения объемов плазмы и форменных элементов проводится в градуированном стеклянном капилляре − гематокрите. Капилляр предварительно промойте 5 % цитратом натрия. Затем заполните его кровью и закрепите в насадке центрифуги, в пружинящей рамке, фиксируя скобой. При центрифугировании ручку горизонтальной центрифуги Шкляра вращайте со скоростью 60 – 70 оборотов в минуту. При этом насадка вращается со скоростью около 7000 оборотов в минуту. Центрифугируйте кровь в течение 1 минуты. Затем насадку снимите. Обратите внимания, что форменные элементы располагаются в периферических концах капилляра, а плазма − в центре. По делениям капилляра вычислите соотношение между объемами плазмы и форменных элементов и выразите полученные данные в объемных процентах и в условных единицах.

ВЫВОД (сделайте вывод о соотношение объемов плазмы и форменных элементов крови):__________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Практическая работа 3. Подсчет форменных элементов крови с помощью камеры Горяева

Оборудование и материалы:______________________________________________________

Цель:___________________________________________________________________________

Ход работы:

Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеются четыре желобка. Между ними образуются узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от него расположены сетки, нанесенные на стекло. При наложении на боковые площадки покровного стекла над сеткой образуется камера высотой 0,1 мм. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов. Каждый третий квадрат разделен на 16 маленьких квадратов. Таких больших квадратов, разделенных на маленькие, в сетке 25. Сторона маленького квадрата равняется 1/20 мм, площадь − 1/400 мм², а объем пространства над маленьким квадратом равен 1/400 мм²×1/10 мм=1/4000 мм³. Познакомьтесь со счетной камерой и сеткой, поместив ее под микроскоп и рассмотрев при малом и большом увеличениях. Зарисуйте внешний вид камеры Горяева и счетной сетки. На рисунке обозначьте большой и малый квадраты.

Рисунок (камера Горяева):

Перед подсчетом форменных элементов в камере Горяева цельную кровь необходимо предварительно развести. Для этого используется специальный смеситель крови (меланжер), который представляет собой стеклянную пипетку с ампулообразным расширением. В ампуле находится стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови. В смесителе для эритроцитов бусинка красного цвета, а в смесителе для лейкоцитов − белого. На капилляре нанесены две метки: «0,5» и «1,0»; третья метка стоит за ампулообразным расширением: на смесителе для эритроцитов − «101», для лейкоцитов − «11». Если в смеситель для эритроцитов набирают кровь до метки «1,0», а затем наливают разбавляющую жидкость, доводя общий объем до «101», кровь разводится в 100 раз. Для разведения в 200 раз кровь следует набирать в смеситель до метки «0,5». Аналогично в смесителе для лейкоцитов получают разбавление крови в 10 и 20 раз. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют гипертонический раствор NaCl (3 %), в котором эритроциты сморщиваются. При подсчете лейкоцитов применяют 3 % раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Уксусная кислота разрушает оболочки эритроцитов, при этом они становятся невидимыми и не мешают подсчету лейкоцитов. А метиленовая синь окрашивает ядра последних.

Зарисуйте смесители для эритроцитов и лейкоцитов. Обозначьте их составные части и метки.

Рисунок (смесители):

Кровь испытуемого или донорскую кровь при помощи груши наберите в капилляр смесителя для эритроцитов до метки «0,5» (следите, чтобы не попали пузырьки воздуха). Вытрите конец и стенки капилляра фильтровальной бумагой и быстро перенесите его в раствор для разведения крови – 3 % NaCl, который наберите до метки «101». Аналогичным образом заполните и смеситель для лейкоцитов (кровь до метки «0,5», а раствор (3 % уксусной кислоты с метиленовой синью) – до метки «11»). В горизонтальном положении аккуратно снимите резиновую трубку со смесителя, зажмите большим и указательным пальцем оба его конца и встряхивайте его в течение минуты. После чего меланжеры оставьте еще на 10 мин в горизонтальном положении.

В клинической практике наряду с меланжерным способом разведения крови используется пробирочный. Для этого в химическую пробирку к 4 мл 3 % NaCl добавляют набранные микропипеткой Сали 0,02 мл крови, аккуратно перемешивают и используют для подсчета эритроцитов. Для подсчета лейкоцитов кровь предварительно разводят следующим образом: в химическую пробирку к 0,4 % уксусной кислоты добавляют набранным микропипеткой Сали 0,02 мл крови. В обоих вариантах, и меланжерном, и в пробирочном, кратность разведения цельной крови аналогична, а именно, для эритроцитов – 200, для лейкоцитов – 20.

Подсчет форменных элементов крови. Сетку камеры плотно накройте покровным стеклом, притерев последнее до появления цветных колец Ньютона. Это служит показателем того, что стекла прилегают вплотную. Тогда высота камеры над счетной сеткой – 0,1 мм. Предварительно выдуйте три капли на вату (это не содержащий форменных элементов крови раствор в капилляре). Следующую каплю разведенной крови поместите на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла. Капля заполнит камеру под действием капиллярных сил. Излишек раствора при этом стечет в желобки. Если на сетку попал воздух, то камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Заполненную камеру поместите под микроскоп и приступайте к подсчету. Считать следует при малом увеличении.

Посчитайте число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в различных местах сетки, например, по диагонали. Необходимо считать все эритроциты, которые находятся внутри квадратов, а также на верхней и левой сторонах всех малых квадратов. Найдите среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Для этого полученное число эритроцитов (Э) поделите на 80 (в 1 большом квадрате находится 16 маленьких: 5×16=80). Объем пространства над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм³. Умножая полученное число на 4000, получите количество эритроцитов в 1 мм³ (мкл) разведенной крови; умножая на 200, получите количество эритроцитов в 1 мм³ (мкл) цельной крови. Итоговая формула для подсчета следующая:

Число эритроцитов в 1 мкл =

где Э − найденная сумма эритроцитов в 5 больших (80 маленьких) квадратах.

Подсчет лейкоцитов (Л) произведите в 25 больших квадратах (400 маленьких). Итоговая формула для подсчета лейкоцитов следующая:

Число лейкоцитов в 1 мкл = ,

где Л − сумма лейкоцитов в 25 больших (400 маленьких) квадратах.

РЕЗУЛЬТАТЫ подсчета форменных элементов крови занесите в таблицу 5-6 и сравните полученные значения с нормой:

Таблица 5-6

Клетки крови	Количество форменных элементов, ед/л
	полученные значения	норма
Эритроциты
Лейкоциты

ВЫВОД (сделайте вывод о количестве эритроцитов и лейкоцитов в исследуемых образцах крови):_________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

Практическая работа 4. Определение содержания гемоглобина (Нв) в крови с помощью гемометра Сали

Оборудование и материалы:______________________________________________________

Цель:___________________________________________________________________________