Определение общего белка методом Лоури

Lowry O.H. et. al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. – 1951. – v. 193. – P. 265-275

ПРИНЦИП МЕТОДА

Метод основан на образовании окрашенных продуктов реакции ароматических аминокислот с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи.

Чувствительность метода: 0,01 – 0,1 мг / мл (10 – 100 мкг / мл).

РЕАКТИВЫ

реактив А: 2% Na₂CO₃ в 0,1 н. NaOH = 20 г Na₂CO₃ в (4 г NaOH в 1 л дис-воды)

реактив Б: 0,5% CuSO₄ в 1% К-Na виннокислом = 0,1 г CuSO₄×5H₂O в (0,2 г К-Na виннокис в 20 мл дис

реактив С: смешать реактив А и реактив Б в пропорции 50 : 1. Стабилен 1-2 месяца

реактив Фолина разбавленный дис-водой 1 : 1. Готовить перед опытом.

Стандартный раствор белка: 0,1 мг/мл.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ

0,5 мл биосубстрата S

+ 2 мл реактива С

выдержать 10 мин.

+ 0,2 мл реактива Фолина разбавленного (р-в 5)

выдержать 30 мин.

Измерить оптическую плотность на ФЭК при  = 750 нм

холостая проба: вместо биосубстрата S взять дис-воду, обрабатывать так же, как опытные пробы.

Расчет по калибратору: С [мг/мл] =