2.7.3. Визначення креатиніну

Креатинін є кінцевим продуктом розщеплення креатину, який відіграє важливу роль в енергетичному обміні м’язової тканини. почи-нається синтез креатиніну в нирках, а закінчується у печінці, звідки він надходить у м’язову тканину і мозок. Тут він фосфорилується і перетворюється в креатинфосфат – сполуку, яка багата на макроергічні зв’язки і є джерелом енергії, необхідної для скорочення м’язів.

2.7.3.1. Визначення креатиніну за колірною реакцією Яффе

Принцип методу. Креатинін у лужному середовищі реагує з пікриновою кислотою з утворенням сполуки оранжево-червоного кольору, що має максимум поглинання при довжині хвилі 510 нм. Інтенсивність забарвлення пропорційна концентрації креатиніну.

Обладнання: фотоелектроколориметр, водяна баня.

Реактиви (склад набору): 1) реагент 1 (10 %-ний розчин NаОН) – 105 мл; 2) реагент 2 (насичений розчин пікринової кислоти) – 105 мл; 3) реагент 3 (креатинін, 440 мкмоль/л) – 5 мл.

Використовують набір реактивів НВФ “Simko-Ltd” (м. Львів).

Хід визначення. Сечу розводять дистильованою водою в 10 разів. Змішуванням одного об’єму реагенту 1 з одним об’ємом реагенту 2 готують робочий реактив (зберігає стабільність не менше 4 год при кімнат-ній температурі). До 0,1 мл розведеної сечі додають 2 мл робочого реактиву. Перемішують, інкубують протягом 15 хв у водяній бані при температурі 37°С. Аналогічно обробляють 0,1 мл реагенту № 3 (креатинін-еталон з концентрацією 440 мкмоль/л) та 0,1 мл дистильованої води (контроль).

Проти контролю відразу визначають оптичну густину креатинін-еталону і досліджуваних проб при довжині хвилі 490–510 нм. Стабільність кінцевої реакції зберігається не більше 30 хв.

Розрахунок проводять за формулою:

Креатинін (мкмоль/л)

де Е_пр – екстинція досліджуваної проби (розведеної в 10 разів сечі); Е_ет – екстинція креатинін-еталону (реагент № 3); 5 – концентрація креатиніну в реагенті № 3, виражена мг/100 мл; 10 – фактор розведення сечі перед аналізом; 88,6 – коефіцієнт перерахунку мг/100 мл в мкмоль/л.

Приклад: Поглинання досліджуваної проби – 0,275

Поглинання креатинін-еталону – 0, 279

Вміст креатиніну в досліджуваній пробі буде:

0,275 : 0,279 × 5 × 10 × 88,6 = 4366,5 мкмоль/л.

Кліренс креатиніну розраховують за формулою:

Кліренс (мл/хв) = .

Приклад. Концентрація креатиніну в сечі = 0,275 : 0,279×5×10 = 49,3 мг/дл

Концентрація креатиніну сироватки = 124 мкмоль/л або 1,4 мг/дл

Об’єм сечі (мл/хв) = 1900 мл : 1440 хв = 1,32 мл/хв

Кліренс креатиніну = 49,3 × 1,32 : 1,4 = 46,48 мл/хв

Примітка. Об’єми досліджуваних зразків та реагентів можна пропорційно зменшувати або збільшувати. Наприклад: до 0,05 мл проби додати 1,0 мл робочого реактиву або до 0,15 проби додати 3 мл робочого реактиву. Далі див. хід визначення.

Реакція є лінійною в діапазоні 0–1320 мкмоль/л (0–15 мг/дл) креатиніну.

Речовини, що спотворюють результати: реакція Яффе не є специфічною. Речовини з активною метиленовою групою, глюкоза, стабілізатори, що присутні в більшості комерційних сироваток, деякі ліки та інші речовини завищують результати.

Стабільність досліджуваних зразків. Креатинін зберігається в сечі протягом тижня при 0–8 °С або до 3-х місяців у замороженому стані. Добову сечу стабілізують додаванням 15 г борної кислоти.