Вопросы для самостоятельной подготовки

1. История развития представления об эритропоэзе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ

Опыт № 1. Определение количества эритроцитов в камере Горяева.

Цель опыта: научиться определять количество эритроцитов простейшим методом подсчета клеток в специальной камере

Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеется 4 желобка. Между ними образуются 3 узкие пластинки. Средняя пластинка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны среднего желобка расположены сетки. Т.к. высота боковых пластинок на 0,1 мм больше средней, то если к ним притереть специальное покровное стекло, над сеткой образуется камера глубиной 0,1 мм.

Если камеру поместить под микроскоп и рассмотреть под малым увеличением, то можно увидеть, что сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 по вертикали и 15 по горизонтали). Каждый 3 квадрат разделен дополнительно поперечными и продольными линиями на 16 маленьких квадратиков. Сторона маленького квадратика равна 1\20 мм, а площадь 1\ 400 кв. мм, объем малого квадратика равен 1\4000 куб.мм.

Для взятия определенного количества крови и смешивания ее с разводящим раствором используют специальный смеситель – меланжер. Меланжер представляет собой стеклянную пипетку с ампулообразным расширением. В ампуле находится красная бусинка для лучшего размешивания крови. На капиллярной части меланжера нанесены 2 метки: 0,5 и 1; третья метка стоит за ампулообразным расширением –101. Эта метка указывает во сколько раз объем ампулы больше объема капилляра (разведение крови).

Ход работы. Перед началом работы протирают покровное стекло, накладывают его на счетную камеру и несколько раз двигают вверх и вниз, плотно прижимая его до появления ньютоновских колец. В небольшую емкость отливают раствор для разведения крови-3,5 % раствор хлористого натрия.

Моют руки, обрабатывают палец спиртом и делают прокол одноразовым скарификатором, или скарификатором, прожженным над пламенем спиртовки докрасна. Первую каплю крови вытирают сухой ваткой и тогда следующая капля на сухой обезжиренной поверхности не будет растекаться. В смеситель набирают кровь сплошным столбиком до метки 0,5, а затем до метки 101 разводят 3,5 % раствором NaCl (получают разведение в 200 раз). В гипертоническом растворе NaCl эритроциты теряют воду, сморщиваются и будут лучше видны. Концы заполненного меланжера зажимают 1 и 3 пальцами и в течение 1 минуты встряхивают. После тщательного перемешивания крови, несколько капель ее из меланжера выпускают на вату (должна появиться розовая капля) и затем заполняют счетную камеру, прикасаясь концом меланжера к краю покровного стекла.

Считать эритроциты удобней при большом увеличении. Подсчет ведут в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, расположенных по диагонали сетки. Чтобы дважды не сосчитать эритроциты, лежащие на границе между малыми квадратами, руководствуются правилом Егорова: относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе, в данном квадратике не подсчитываются. Количество эритроцитов вычисляют по формуле

А . 4000 .200

Х = ----------------------

80

где Х - искомое число, А – число эритроцитов в 5 больших квадратах или в 80 маленьких, 4000 – количество малых квадратиков в 1 куб. мм, 200 –разведение крови. Х – количество эритроцитов в 1 мкл крови.

Опыт № 2. Определение количества эритроцитов фотоэлектрическим эритрогемометром.

Цель опыта: ознакомится с автоматизированным методом подсчета эритроцитов.

Порядок проведения работы. Определение числа эритроцитов в крови основано на фотоэлектрическом измерении степени поглощения света взвесью эритроцитов. При определении числа эритроцитов измерения ведутся в инфракрасной части спектра. Производится начальная установка прибора. Для этого оправу с рабочими фильтрами ставят в нижнее положение до упора. В гнездо для кювет ставят установочный фильтр «У». Переключатель «Э-Г» переводят в положение «Э». Отсчетный диск с помощью ручки устанавливают в такое положение, чтобы риска совпала с делением градусной шкалы на «0», значение которой в градусах выгравировано на верхней торцовой поверхности установочного фильтра против буквы «Э». Ручкой «Уст. нуля» устанавливают стрелку микроамперметра на « О» шкалы. Затем готовят пробу: пипеткой на 15 куб. см наливают 14 мл 3,5% раствора NaCl в чистую пробирку, сюда же вводят 20 куб.мм исследуемой крови. Содержимое пробирки перемешивают, не встряхивая. После этого заменяют фильтр «У» кюветой «Э» с приготовленной смесью. Определение начинают через 50-60 секунд после заполнения кюветы. При этом стрелка микроамперметра отклонится от «О» шкалы. Вращая ручку отсчетного диска, надо добиться возвращения стрелки микроамперметра на «О». На шкале считывают показание в млн. эритроцитов в куб.мм.

Опыт № 3. Определение гемоглобина методом Сали.

Цель работы: Научиться определять содержание гемоглобина колориметрическим способом.

Гематиновый метод Сали основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с НС1.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина, а средняя градуированная предназначена для проведения исследования. Стандартный раствор солянокислого гематина по цвету соответствует 167 г\л гемоглобина.

Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен.

Ход работы: в среднюю пробирку наливают 0,1 N раствор НСl до нижней круговой метки. Пипеткой берут 20 куб. мм крови из пальца до метки, обтирают ее кончик ватой и выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку, споласкивают ее кислотой. После этого содержимое пробирки перемешивают и ставят в штатив на 5-10 минут. Это время необходимо для полного превращения Нв в солянокислый гематин. Затем к содержимому пробирки добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет совершенно одинаков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).

Цифра на уровне верхней границы полученного раствора, показывает абсолютное содержание Нв в испытуемой крови, выраженное в г%. Значение следует перевести в г\л, т.е. умножить на 10.

Опыт № 4. Измерение количества гемоглобина эритрогемометром.

Цель опыта: Ознакомиться с определением гемоглобина эритрогемометром.

Определение количества Нв основано на фотоэлектрическом измерении степени поглощения света раствором Нв. Определение ведется в зеленой части спектра.

Ход работы: пипеткой налить 5 куб. мм 0,1% раствора уксусной кислоты в чистую сухую пробирку и сюда же ввести 40 мкл исследуемой крови, взятой пипеткой для Нв. Содержимое пробирки перемешать без встряхивания. Затем содержимое пробирки налить в кювету с отметкой «Г». Вращая ручку диска эритрогемометра, добиться возвращения стрелки миллиамперметра на «0» и на шкале «Нв» посмотреть содержимое Нв в г%.

Опыт № 5. Вычисление цветного показателя.

Цель опыта: научиться способам расчета цветного показателя.

Цветной показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. В одном нормальном эритроците содержится 33 пг гемоглобина, эту величину принимают за единицу и обозначают как цветной показатель. Практически цветной показатель вычисляют по следующей формуле:

________Нв в г% х 3___________________

Цветной показатель (ЦП) = первые 2 цифры числа эритроцитов в 1 мкл

Существует и другая формула расчета цветного показателя.

Нв найденный количество эритроцитов найденных

ЦП = --------------------------- х -------------------------------------------------

Нв норм.( в г%-16,7) кол-во эритроцитов норм (5 млн. в мкл)

При патологических состояниях ЦП может быть >1(гиперхромия), или <1- гипохромия.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ

1. История развития представления об эритропоэзе.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1. Анализ крови показал, что диаметр эритроцитов – 5 микрон. Что это означает? Как называется? Чем может быть вызвано это явление?

2. Оперируемому больному назначили вливание цельной крови. Какая цель преследуется? Какие функции выполнит кровь?

3. Количество эритроцитов в общем анализе крови у обследуемого составило 5,9 млн. в 1 мкл. Исследование проводилось сразу после возвращения из отпуска. С чем это может быть связано?

4. Известно, что диаметр капилляра меньше диаметра эритроцита. Почему нормальный эритроцит свободно проходит через него?

5. Как изменится гематокрит при переливании кровезаменителей?

6. В мазке определили эритроциты нормального диаметра, но бледно окрашенные. О чем это говорит?

7. Вследствие большой физической нагрузки некоторые группы мышц у спортсменов сильно сокращены, что ведет к суживанию капилляров и прекращению тока крови по ним. Как осуществляется при этом снабжение мышечных волокон кислородом?

ЗАНЯТИЕ № 2