Тема 24. Заражение куриного эмбриона. Способы заражения.

2.Цель:сформировать у студентов знания о значении вирусов и фагов в патологии человека; о вирусологических методах исследования, принципах индикации и идентификации вирусов.

3. Задачи обучения:

Сформировать у студента знания:

- о принципах систематики вирусов;

- о вирусологических методах исследования;

- о принципах индикации и идентификации вирусов;

- об основных видах бактериофагов, их свойствах.

- о практическом применении бактериофагов;

Сформировать практические навыки:

- по технике заражения куриного эмбриона;

- по интерпретации полученных результатов фаготипирования, титрования по Аппельману и Грациа.

4. Основные вопросы темы:

1. Принцип классификации и номенклатуры вирусов.

2. Методы культивирования вирусов.

3. Методы индикации и идентификации вирусов.

4. Знакомство с устройством вирусологической лаборатории.

5. Методы исследования при вирусных инфекциях.

7. Природа и свойства бактериофагов, особенности химического состава. Основные морфологические группы фагов.

8. Определение титра фага по Аппелману и Грациа.

9. Практическое применение фага.

5. Методы обучения и преподавания:(малые группы, дискуссия, сит.Задачи, работа в парах,презентации, кейс-стади и т.Д.)

Пассивный метод- опрос, объяснение.

Активный метод (Выполнение и обсуждение практических работ, оформление протоколов.работа с мультимедийными базами данных, компьютерными моделями и программами.)

Интерактивный (решение ситуационных задач, работа в группах, блиц-опрос, деловые и ролевые игры, мозговой штурм, критическое мышление, мини-исследования и т.п.)

5. Методы обучения и преподавания:(малые группы, дискуссия, сит.Задачи, работа в парах,презентации, кейс-стади и т.Д.)

Пассивный метод- опрос, объяснение.

Активный метод (Выполнение и обсуждение практических работ, оформление протоколов.работа с мультимедийными базами данных, компьютерными моделями и программами.)

Интерактивный (решение ситуационных задач, работа в группах, блиц-опрос, деловые и ролевые игры, мозговой штурм, критическое мышление, мини-исследования и т.п.)

8. Литература:

Основная:

1.Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология.- М.: МИА, 2005. - 734 с.

2.Медицинская микробиология, вирусология, иммунология (под ред. Воробьёв А.А) МИА., Москва, 2004.- 690с.

3.Коротяев А.И, Бабичев С.Л. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СПб.: Спец. лит, 2000. - 591 с.

4.Медицинская микробиология /Гл.ред В.И. Покровский, O.K. Поздеев. - М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2006. — 1200 с.

5.Тец В.В. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии – М.:Медицина, 2002. - 352 с.

6.Компьютерная программа "Диаморф" - "Медицинская микробиология" - атлас-руководство по бактериологии микологии, протозоологии и вирусологии под редакцией акад.проф. Воробьева А.А.

7.Дикий И.Л, Сидарчук И.И. и др. Микробиология. Руководство к лабораторным занятием. Киев, 2004, 583 с.

Дополнительная:

1.Борисов Л.Б., Козьмин-Соколов Б.В., Фрейдлин И.С. Руководство клабораторным занятиямпо медицинской микробиологии, вирусологии, иммунологии. - М.: Медицина, 1993.

2.Н.Красилыников А II. Справочник по антисептике. - Минск. - Выс шк.- 1995. - 367с.

3.Галактионов В.Т. Иммунология. - М. - Изд. "РИЦ МДК". - 2000. – 487с.

4.Воробьев А.А. "Микробиология, иммунология". - М.: МИА, 2002.

5.Воробьев А.А., Кривошейн Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарнаямикробиология. - М.: Издательский центр "Академия" – 2003. – 464 с.

6.Аравийский Р.А., Горшкова Г.И. Практикум по медицинской микологии. - С-Пб. - 1995. - 50 с.

7.Всант P., Мосс У., Уивер Р. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (аэробных и факультативно-анаэробных). - М.: Мир, 1999. – 791 с.

8.Внутрибольничные инфекции // Под ред. Р.П.Венцелла. - М.:Медицина, 1990.- 656 с.

9.Саттон Д., Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно-патогенных грибов. - Изд. Мир, 2001. - 470 с.

10.МаянскийА.Н.Микробиология дляврачей. - Нижний Новгород: Издательство Нижегородской государственной медицинской академии, 1999. — 400 с.

11.Котова А.Л. Клиническая микробиология: Методические указания.-Алматы, 2004.- 162с.

12.Тец В.В. Справочник по клинической микробиологии – СП Стройлеспечать. – 1994.– 224 с.

13.Определитель бактерий Берджи /Под ред Д.Хоулта, Н.Крига, П.Снитаи др.// М.: Мир, 1997. - в 2 томах.

14.Вопросы общей вирусологии, под ред. Кисилева И.О. Санкт- Петербург, 2007, 375 с.

15.Поздеев О.К. Медицинская микробиология: Учеб. О.К.Поздеев; под ред. В.И.Покровского.-2-е изд.испр.-М.:ГЭОТАР-МЕД,2004.-768 с

На казахском языке:

Основная:

1. Медициналық микробиология , Алматы,2011,683 б Рамазанова Б.А, Кудайбергенұлы К.К редакциялаумен.

2. Б.А. Рамазанова, А.Л. Котова және т.б. Микроорганизмдер морфологиясы.(оқу- әдістемелік құрал) Алматы,2007, 131б.

3. Б.А. Рамазанова, К.К Құдайбергенұлы, А.Л Котова. Инфекция туралы ілім.(оқу-құралы) Алматы 2007,111 б .

4. Б.А.Рамазанова, А.Л Котова және т.б. Микроорганизмдер физиологиясы. (оқу - әдістемелік құрал). Алматы,2007, 126 б.

5. Б.А. Рамазанова, А.Л Котова және т.б. Микроорганизмдер экологиясы. (оқу- құралы). Алматы, 2007, 95 б.

6. Б.А. Рамазанова, А.Л Котова және т.б. Микробтарға қарсы қолданылатын препараттар (оқу- құралы) Алматы, 2007.,47 б.

7. Микробиология және вирусология (жалпы бөлімі): Оқу құралы /Ү.Т.Арықпаева, К.Х.Алмағамбетов, Н.М.Бисенова, Н.Б.Рахметова, Г.Д.Асемова, Койшебаева К.Б., Бисимбаева С.К., Калина Н.В./. 1-ші басылым. (Медициналық және фармацевтикалық мамандық бойынша жоғары оқу орындарының студенттеріне арналған оқу құралы) - Астана, 2005. – 208 б.

8. «Микроорганизмдердің морфологиясы» оқу құралы, Астана, 2004, 32б.; Микробиология және вирусология (жеке бөлімі): Оқу құралы /Ү.Т.Арықпаева, К.Х.Алмағамбетов, Н.М.Бисенова, Ә.Ө.Байдүйсенова, Н.Б.Рахметова, Г.Д.Асемова /1-ші басылым. (Медициналық және фармацевтикалық мамандық бойынша жоғары оқу орындарының студенттеріне арналған оқу құралы) - Астана, 2006. – 199 б.

Дополнительная:

1. Жалпы микробиологиядан лабораториялық сабақтар бойынша оқу-әдістемелік құрал (А.Л. Котованың ред.). – Алматы, 1997.

На английском языке:

Основная:

1.Richard V Georing, Hazel M Docrell, Mark Zukerman, Derek Wakelin, Ivan M Roit, Cedric Mims,Peter L Chiodini “Medical Microbiology”,4^th Edithion, 2008, UK, p.656.

2.Jacquelyn G Black “Microbiology”,7 ^th ,WILEY,2010,p.846

3. Patric R Muray,Ken S Rosenthal, Michael F Pfaller “Medical Mcrobiology”,5^th Edithion, 2008,p.962

4. Cedric Mims, Hazel M Docrell, Richard V Georing , Ivan M Roit, Derek Wakelin, Mark Zukerman, “Medical Microbiology”,3^th Edithion, 2004, ELSEVIER MOSBY, p.659.

5. Geo F Brooks,Kaaren C Carroll, Janett S Butel, Stephen F Morse,24^th Edithion, JAWETZ,MELNICK&ADELBERG^S

6. Mark Gladwin, Bill Trattler, “Clinical Microbiology”, 4^th Edithion, MedMaster, Miami, 2007, p.393.

7. Anathanarayan R., Paniker C.K.J. Text book of microbiology. Orien Longman. Seven edition, 2005.

8. Medical microbiology. Ed.by Inta Ozols. Elsevier Mosby, 2004.

Дополнительная:

1.Robert M Diamond “Designing Assessing Courses and Curricula”, 3^th Edithion,Jossey-Bass,2008,p.487

2.Patric Leonardi “Microbiology Study Guide: Key Review Questions and Answers”, Silver Educational Publishig,2005,p.78

3.N.Cary Engelberg,Victor DiRita,Terence S Dermondy, “Mechanisms of Microbial Disease” , 4^th Edithion,Lippincton Williams&Wilkins,2007,p.762

4.William F Strohl, Harriet Rouse, Bruce D Fisher, “Microbiology”, Lippincton^s,2001,p.516

5.Jawetz, Melnic & Adelberg. Medical microbiology. Singapore. 2004.

6.Arora D.R. Text book of microbiology. CB. 2001.

7.William A. Stradit, Harriet Rouse, Bruce D. Fisher. Microbiology. 2001, Lippencott, Williams and Wilkins

8.Black Jacquelyn G. Microbiology. Principles & Applications, 1996 by Prentice-Hall, New Jersey

9.Medical microbiology. An introduction to Infectious Diseases. Ed. by Ryan Kenneth J. Appleton and Lange. Stamford, Connecticut, 1998.

10.Toni Hart, Paul Shears. Atlas de Roche de Microbiologie. - Paris., 1997.- 314р.

7. Контроль ( вопросы,тесты, задачи и пр):

Вопросы:

1. Современные принципы классификации и номенклатуры вирусов

2. Методы исследования при вирусных инфекциях.

3. Методы культивирования вирусов.

4. Как проводится отбор и подготовка куриных эмбрионов для заражения?

5. Наиболее часто используемые методы заражения куриных эмбрионов.

6. Что называется культурой клеток? Для каких целей применяется?

7. Какие культуры клеток называются перевиваемыми и полуперевиваемыми?

8. Какие культуры клеток называются первичными и однослойными?

9. Патологический материал и его обработка для заражения культуры клеток.

10. Какие видимые изменения наблюдаются в клетке при действии на нее вируса? Понятие цитопатогенного действиявируса на клетку.

11. Как можно доказать вирусную природу наступивших изменений в культуре клеток?

12. Сущность реакции гемадсорбции.

13. Сущность реакции бляшкообразования.

14. Сущность фаготипирования.

15. Сущность реакции титрования фага по Аппельману и Грациа.

16. Практическое применение фага.

Ситуационные задачи:

1. Перед студентом в пробирке находится культура клеток зараженным носоглоточным смывом от больного. Под микроскопом видны клетки неправильной формы, некоторые из них отслоились от стенок пробирки, имеются межклеточные разрывы, цвет питательной среды - красный. О чем свидетельствуют такие явления?

О т в е т: О цитопатическом действии вирусов, имеющихся в носоглоточном смыве.

2. Как определить рабочее разведение бактериофага?

О т в е т: Титрование фага производится по методу Аппельмана ( в жидкой питательной среде). Опыт ставится в 12 пробирках, содержащих по 4,5 мл МПБ. В 1 пробирку вносят 0,5 мл испытуемого фага, затем содержимое пробирки перемешивают и 0,5 мл переносят во 2 пробирку и т.д. и получают разведения фага с 10\-10, затем во все пробирки вносят 0,2 мл суточной бульонной культуры, соотвествующей титруемому фагу. Титр фага регистрируется по последней пробирке с лизисом культуры. Если разведение фага производить в полужидком агаре, куда затем добавляется живая культура гомологичных бактерий и эта смесь выливается вторым слоем на слой МПА в чашке (метод Грациа), то фаг регистрируется по количеству негативных пятен.

Тесты:

1.ВИРУСЫ:

1.Одноклеточные формы жизни

2. «Инфекционные» белковые частицы

3. Лишены генетического материала

4. Размножаются вне клетки

5. Не способны жить и размножаться вне животной или растительной клетки

2. ОСНОВНЫЕ ПРИЗНАКИ ВИРУСОВ:

1. Содержат ДНК или РНК

2. Содержат ДНК и РНК

3. Размеры в микронах

4. Растут на искусственных питательных средах

5. Имеют клеточное строение

3. ВИРУСЫ КУЛЬТИВИРУЮТ:

1. На средах с добавлением нативного белка

2. В развивающемся курином эмбрионе

3. На среде Левенштейна-Иенсена

4. На синтетических питательных средах

5. На среде Китт-Тароцци

4. ИНДИКАЦИЮ ВИРУСОВ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК ПРОИЗВОДЯТ:

1. По цитопатическому действию

2. В реакции Асколи

3. Феноменом Исаева-Пфейффера

4. В реакции задержки гемагглютинации

5. В реакции агглютинации

5. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ВКЛЮЧЕНИЯ ПРЕДСТАВЛЯЮТ СОБОЙ:

1. Митохондрии

2. Отдельные вирусные частицы

3. Скопление хромосом

4. Оболочки вирусов

5. Продукты реактивного изменения клетки

6. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ВКЛЮЧЕНИЯ ИМЕЮТ ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПРИ:

1. Бешенстве

2. Сыпном тифе

3. Клещевом энцефалите

4. Коксаки-инфекции

5. СПИДе

7. ЦИТОПАТОГЕННОЕ ДЕЙСТВИЕ ВИРУСОВ:

1. Не зависит от физических, химических, биологических факторов внешней среды

2. Зависит только от инфекционности вируса

3. Повышается под влиянием интерферона

4. Используется при индикации вирусов

5. Используется при идентификации вирусов

8. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В КЛЕТКАХ ВЫЯВЛЯЮТСЯ С ПОМОЩЬЮ:

1. Темнопольной микроскопии

2. Окраски по Морозову

3. Метода «бляшек»

4. Реакции гемагглютинации

5. Окраски по Граму

9. К ТИПАМ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР НЕ ОТНОСИТСЯ:

1. Неживые клетки

2. Перевиваемые

3. Первичные

4. Диплоидные

5. Клональные

10.ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АДСОРБЦИИ ВИРУСА НА ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ КЛЕТКАХ НЕОБХОДИМО:

1. Наличие в среде интерферона

2. Наличие соответствующих рецепторов на поверхности клетки

3. Присутствие нуклеаз

4. Присутствие комплемента

5. Наличие пермеаз

11. ИНДИКАЦИЮ ВИРУСОВ ПРОВОДЯТ ВСЕМИ НИЖЕ ПЕРЕЧИСЛЕННЫМИ МЕТОДАМИ, КРОМЕ:

1. Цитопатогенного действия

2. Реакции агглютинации

3. Реакции гемадсорбции

4. Метода бляшек

5. Реакции гемагглютинации

12. В ПРИСЛАННОМ В ЛАБОРАТОРИЮ МАТЕРИАЛА ВИРУСЫ МОЖНО ОБНАРУЖИТЬ ПРИ:

1. Заражении культуры клеток

2. Заражении куриных эмбрионов

3. Заражении чувствительных лабораторных животных

4. Всем вышеизложенным

5. Ничем из вышеизложенного

13. КОЛОНИИ ВИРУЛЕНТНОГО ФАГА:

1. Бляшки с мутным центром и прозрачной периферией

2. Прозрачные бляшки

3. Выпуклые пигментированные с ровным краем

4. Шероховатые R-формы

5. S-формы, белые

14. ЯВЛЕНИЕ БАКТЕРИОФАГИИ ИЗУЧЕНО:

1. Пастером

2. Д^, Эрелем

3. Кохом

4. Ивановским

5. Мечниковым

15. ФАГ ТИТРУЕТСЯ ПО:

1. Коху

2. Гамалея

3. Творту

4. Грациа

5. Д^, Эрелю

16. ФАГОТИПИРОВАНИЕ ПРИМЕНЯЕТСЯ ДЛЯ:

1. Биологической индикации ионизирующей радиации

2. Определения болезнетворности бактерий

3. Получения вакцинных штаммов

4. Повышения вирулентности бактерий

5. Установления источника инфицирования

17. ФАГИ РАЗРУШАЮТСЯ ПОД ВЛИЯНИЕМ:

1. 1% раствора фенола

2. 0,5% раствора сулемы

3. Ультрафиолетовых лучей

4. При давлении в 1 атмосферу

5. Бриллиантовой зелени

18. БАКТЕРИОФАГИ НЕ ПРИМЕНЯЮТСЯ ДЛЯ:

1. Лечения

2. Создания искусственного иммунитета

3. Установления источника инфекции

4. Профилактики заболеваний

5. Диагностики.

ТЕЗАУРУС (глоссарий):

Вирус

Вирион

Культура клеток

Куриный эмбрион

Индикация вируса

Идентификация вируса

Перевиваемые культуры клеток

Фаготипирование

Примерный хронометраж занятия:

№ п/п	Этап занятия	Содержание этапа занятия	Методы обучения (по выбору преподавателя)	Методы контроля (по выбору преподавателя)	Отведенное время, на этап / мин
1	Вводный	Приветствие, перекличка, оглашение темы, цели и задач, оглашение осваиваемых компетенций, мотивационная характеристика	-	-	10 мин.
2	Контроль исходного уровня знаний	Определение исходного и текущего уровней знаний по данной теме	-	Тестирование Устный опрос	5 мин. 35 мин.
3	Бодрячок	-	Интерактивный	-	5 мин.
4	Перерыв	-	-	-	5 мин.
5	Основной этап	Работа с демонстрационным материалом. Заражение куриного эмбриона.	Пассивный (объяснение, демонстрация, наблюдение). Активный (Выполнение и обсуждение практических работ, оформление протоколов, рабочих тетрадей, работа с мультимедийными базами данных, компьютерными моделями и программами.) Интерактивный (решение ситуационных задач, кроссвордов, работа в группах, блиц-опрос, деловые и ролевые игры, мозговой штурм, критическое мышление, мини-исследования и т.п.)	Проверка рабочей тетради.	35 мин.
6.	Подведение итогов занятия. Обсуждение достижения целей и решения поставленных задач, освоенных компетенций. Оглашение оценок и выставление их в журнал	Заполнение оценочных листов	Пассивный	-	10 мин
7.	Комментарии к домашнему заданию по теме следующего занятия	-	Пассивный	-	5 мин