6. Методы создания анаэробных условий для культивирования облигатных анаэробов

Способы выделения анаэробов основаны на создании анаэробных условий (снижении парциального давления кислорода в среде), для создания которых применяют следующие методы: 1) удаление кислорода из среды путем выкачивания воздуха или вытеснения индифферентным газом; 2) химическое поглощение кислорода при помощи гидросульфита натрия или пирогаллола; 3) комбинированное механическое и химическое удаление кислорода; 4) биологическое поглощение кислорода облигатными аэробными микроорганизмами, посеянными на одной половине чашки Петри (метод Фортнера); 5) частичное удаление воздуха из жидкой питательной среды путем кипячения ее, добавления редуцирующих веществ (глюкоза, тиогликолат, цистеин, кусочки свежего мяса или печени) и заливки среды вазелиновым маслом; 6) механическая защита от кислорода воздуха, осуществляемая путем посева анаэробов в высокий столбик агара в тонких стеклянных трубках по методу Вейона.

7. Состав среды Китта-Тароцци. Назначение.

Состав – пептон Попэ или пептон Мартена; мясной экстракт (1:2); натрия хлорид; кусочки мяса; агар микробиологический.

Описание.

Представляет собой прозрачную жидкость светло-желтого цвета с кусочками мяса.

Выпускается в виде плотной среды по 300 мл в стеклянных флаконах, укупоренных резиновыми пробками и завальцованных алюминиевыми колпачками.

Назначение.

Предназначена для культивирования патогенных анаэробов.

Срок годности – 1 год. Хранить среду герметически закрытой при температуре от 2 до 25°С в местах, защищенных от воздействия прямых солнечных лучей.

8. Среда Вильсона-Блера, её применение.

Вильсона — Блера среда — это плотная селективная питательная среда для анаэробных бактерий, содержащая сернистокислый натрий и хлорное железо; анаэробные бактерии образуют колонии чер­ного цвета в результате образования сернистого железа.

Среду используют для выявления CI. perfringens. Состав ее следующий: 20%-ный раствор безводного сульфита натрия 10 мл, 20%-ный раствор глюкозы 5 мл, 8%-ный раствор кристаллического железосульфата (ферросульфата) 1 мл, 3%-ный питательный агар 100 мл.

9. Методы выделения чистой культуры облигатных анаэробов

I этап — обогащение на среде Китт — Тароцци, предварительно прокипяченной в течение 30 минут. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются. II этап — получение изолированных колоний На средах Китт — Тароцци обнаруживается помутнение с пузырьками газа. Выделение чистой культуры проводится по одному из следующих методов:

А) по Цейсслеру — каплю материала со среды Китт — Тароцци засевают в чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же шпателем производят посев во второй и третьей чашках;

Б) по Вейнбергу: каплю материала со среды Китт — Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки Виньял — Вейона и инкубируют в термостате. Ш этап — выделение чистой культуры на среде Китт — Тароцци.