51. Культуральная диагностика мягкого шанкра
Материалом для исследования служит отделяемое язвы. Стрептобацилла Петерсена—Дюкрея—Унны растет на средах, содержащих кровь. рН среды должна быть 7,2—1,6. Необходимо сохранить влажность ее, что достигается тщательным закупориванием пробирок.
Имеются сведения о росте стрептобапиллы на 3,5 % мясопептонном агаре с добавлением дефибринированной крови кролика (2: 1).
52. Культуральная диагностика трихомоноза
Наиболее точный метод, который, к сожалению, в практической деятельности врача используется еще сравнительно редко. Это объясняется прежде всего трудностью получения сред, оптимальных для размножения трихомонад. В настоящее время имеется несколько разновидностей сред, многие из них трудно приготовить или в их состав входят не всегда доступные ингредиенты.
В последние годы Центральным научно-исследовательским кожно-венерологическим институтом предложены новые высококачественные среды, которые легко можно приготовить в лаборатории или аптеке. Например, среда СКДМ: дрожжевой аутолизат — 10 мл, солевой раствор— 100 мл, казеина гидролизат—10 мл, сыворотка лошадиная или крупного рогатого скота без консерванта — 30 мл, 20 % водный раствор мальтозы, бензилпенициллин и стрептомицин—по 160000 ЕД. Материалом для посева служат выделения или соскоб со слизистой оболочки, центрифугат первой порции мочи. Выделения или соскоб берут ложечкой Фолышака из мочеиспускательного канала, канала шейки матки, задней части свода влагалища. После посева пробирки помещают в термостат при температуре 37 °С на период от 5 до
15 дней в зависимости от появления роста. Затем из культуры готовят мазки, высушивают, окрашивают и смотрят под микроскопом (см. №70).
53. Лабораторная диагностика глубоких микозов
Для подтверждения диагноза глубокого микоза проводят микроскопические и культуральные исследования, иногда ставят биологические и аллергологические пробы и др. Материалом для исследования служат гной, мокрота, кусочки биопсированной ткани, пунктат лимфатических узлов, гнойников и др. Препараты исследуют в нативном виде или окрашенные. При актиномикозе отмывают друзы от гноя и исследуют под малым увеличением микроскопа в капле воды или глицерина. При микроскопии обнаруживают чаще всего всю друзу с характерным лучистым краем. В случае отсутствия гриба в исследуемом материале последний сеют на среду Сабуро и колонии смотрят под микроскопом.
Препараты, приготовленные из материала или культуры, можно окрашивать по Граму, при этом мицелий гриба окрашивается в синий Цвет, а колбы — в розовый.
При хромомикозе гной, корочки, соскоб с краев язвы вначале обрабатывают едкой щелочью, приготовленные препараты рассматривают под малым увеличением микроскопа. Обнаруживают крупные клетки круглой и овальной формы, желтовато-бурого цвета, с толстой двухконтурной оболочкой, поперечной или продольной перегородкой, а также нити септированного мицелия. Выращенные на среде Сабуро колонии пушистые, напоминают бархатистую ткань, темно-серого или темно-зеленого цвета. В препарате, полученном из культуры, под малым увеличением микроскопа обнаруживают нити мицелия с конидиеносцами, на верхушке которых размещены споры в виде веера.
Препараты, приготовленные из материала, при подозрении на споротрихоз окрашивают по Романовскому — Гимзе. При микроскопии обнаруживают споры гриба в виде челночков, окруженные прозрачной капсулой, и короткие нити мицелия.
При посеве на среду Сабуро колония вначале имеет белый цвет, затем желтеет или окрашивается в черный цвет. В препарате из колонии обнаруживают тонкие ветвящиеся нити мицелия, по бокам которых группами (в виде гроздьев) расположены конидии.
Диагноз глубокого кандидоза внутренних органов ставят при сопоставлении клинических данных и результатов микроскопического исследования экскретов (мочи, кала, плеврального экссудата, желчи, спинномозговой жидкости и др.). Кал и мочу исследуют в едкой щелочи, жидкие экстракты центрифугируют и исследуют центрифугат.
При микроскопии неокрашенных препаратов обнаруживают
Рис. 15. Схема спинномозговой пункции
После пункции больного осторожно укладывают в горизонтальном положении в постель животом вниз и не разрешают двигаться в течение 3—4 ч. Затем можно поворачиваться в постели, желательно не вставать в течение суток. Больным с лабильной нервной системой дают седативные препараты (хлозепид, или элениум, триоксазин, препараты брома, валерианы). С целью профилактики возможных осложнений — раздражения мозговых оболочек — в последующие 2—3 дня внутривенно вводят 5—10 мл 40 % раствора гексаметилентетрамина (уротропина).
Исследование спинномозговой жидкости является необходимым условием для правильной диагностики, выбора тактики лечения и оценки его эффективности при сифилисе. К сожалению, многие врачи недооценивают практическую важность этого метода. В спинномозговой жидкости определяют содержание белка (норма —до 0,4 %), подсчитывают количество форменных элементов (норма — менее 8 клеток),
проводят реакции: Нонне — Апельта и Панди (норма ++), одну из коллоидных (лучше с золота хлоридом), Вассермана в разведениях 0,1; 0,25; 0,5 при наличии в пробирке 2,5 мл жидкости. По возможности ставят реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Реакцию Вассермана (с кардиолишшовым и липидным антигенами), РИФ и РИТ проводят общепринятыми методами (см. №119, 121, 123, 124).
Больного просят сложить руки на животе, голову наклоняют вперед так, чтобы подбородок касался груди, при этом спина выгибается в виде дуги, туловище не должно быть наклонено вниз. При таком положении остистые отростки позвонков максимально раздвигаются, оставляя место для введения иглы. Место прокола выбирают между IV и V или III и IV поясничными позвонками. Палочкой с намотанной на ее конец ватой, смоченной в растворе Люголя, проводят горизонтальную линию, соединяющую верхние края гребней подвздошных костей (линия Якоби). Пересечение этой линии с вертикальной линией, проходящей через середину остистых отростков, и будет соответствовать месту прокола (рис. 15). При прощупывании выявляют незначительное западение. В этом месте ногтем ставят знак в виде креста (место прокола). Врач тщательно моет руки с мылом, высушивает стерильными тампонами, смазывает раствором Люголя и тщательно протирает этиловым спиртом. Кожу больного смазывают раствором Люголя или раствором йода спиртовым 5 %, затем энергично протирают этиловым спиртом и высушивают стерильным марлевым тампоном. Внутрикожно вводят до образования «лимонной корки» 0,5—1 мл 1 % раствора новокаина с целью анестезии, особенно больным с лабильной нервной системой. Через 1—2 мин пункционную иглу вводят непосредственно под остистый отросток IV поясничного позвонка по средней линии, медленно продвигая ее вперед и несколько вверх. Правой руке врача, которая является как бы направляющей, помогает левая, проталкивая иглу вперед. Продвинув иглу на 4—5 см, врач ощущает небольшой хруст (прокол желтой связки), после этого извлекает мандрен, и из иглы начинает вытекать спинномозговая жидкость. В норме она прозрачная, вытекает каплями, которые можно сосчитать. Если жидкость вытекает струей, то это свидетельствует о повышенном давлении в спинномозговом канале. 3—4 мл жидкости собирают в две стерильные пробирки и направляют в лабораторию на исследование. Ватой, смоченной этиловым спиртом, придерживают кожу у основания иглы и медленными винтообразными движениями извлекают ее. Место прокола смазывают раствором йода спиртовым 5 % и накладывают стерильную коллоидную повязку.
множество почкующихся клеток в виде скоплений или разбросанных по полю зрения и нити различного по форме и длине мицелия.
При кокцидиоидозе в нативных препаратах под малым увеличением микроскопа обнаруживают характерные образования в виде сумок диаметром от 20 до 80 мкм. Оболочка их толстая, часто разорвана. Образования наполнены множеством эндоспор, которые высыпаются через отверстие разорванной оболочки.
Культура, выращенная на среде Сабуро, имеет бархатистую поверхность кремового цвета. При микроскопическом исследовании препарата, полученного из колоний, обнаруживают ветвящиеся нити мицелия, артроспоры и хламидоспоры.
При диагностике глубокого бластомикоза типа Джилкрайста материал исследуют под малым увеличением микроскопа с опущенным конденсором. В нативных препаратах удается обнаружить круглые почкующиеся клетки диаметром от 8 до 20 мкм с толстой двухконтурной оболочкой. Культуру гриба выращивают на среде Сабуро при комнатной температуре. Колонии напоминают таковые других дрожжевых культур. При микроскопическом исследовании в препарате обнаруживают длинные нити мицелия, по бокам или на конце (на ножке) которых размещены конидии.