Кафедра морфологических дисциплин

Гистология

Общественное здравоохранение

СРСП

Тема № 1. Основные принципы изготовления гистологических препаратов для световой и электронной микроскопии. Микроскоп.

Шымкент 2013г.

1. Тема: Основные принципы изготовления гистологических препаратов для световой и электронной микроскопии. Микроскоп.

2. Цель занятия:

• Закрепить в памяти технику микроскопирования гистологического препарата.

• Выработать представление о сущности и содержании основных этапов изготовление фиксированного и окрашенного гистологического препарата.

3. Задачи обучения:

• Научиться самостоятельно микроскопировать гистологические препараты.

• Анализировать структурные и тинкторальные особенности препаратов, по которым можно судить о функциональном состоянии изучаемых клеток, тканей и органов.

4. Форма проведения: малые группы.

5. Задания по теме:

• Изучение устройства биологического микроскопа, техники микроскопирования.См. Практикум стр. 8-9.

• Ознакомление с принципами приготовления гистологических препаратов для световой микроскопии в морфологической лаборатории.

6. Раздаточный материал. Оснащение

• Световой микроскоп «Биолам».

• Гистологические микропрепараты

• Аппаратный комплекс для микроскопии и цифровой микрофотографии.

• Набор электронных микрофотографий.

• Батареи для проводки и заливки материала в парафин .

• Блоки с кусочками органов, залитых в парафин

• Батарея для окрашивания срезов гематоксилином и эозином.

• Санный микротом

• Криостат

7. Литература

1. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. – М.: Медицина, 1982.-197с.

2. Юрина Н.А., Радостина А.И. Гистология. – М.: Медицина, 1995. – 256 с

8. Контроль

8.1 Вопросы:

1 Назовите основные этапы изготовления гистологического препарата.

2 В чем сущность фиксации и какие требования предъявляют к фиксаторам?

3 Для чего необходимо уплотнение ткани при изготовлении гистологического препарата и какие используют уплотняющие среды?

4 Как называются приборы для получения срезов и какие основные части в них выделяют?

5 Какова цель окрашивания гистологического препарата?

6 Какие группы красителей используют в гистологической практике? Назовите примеры.

7 Какие структуры при окрашивании называются «оксифильными» и «базофильными»? От чего зависят тинкториальные свойства структур?

8 Что является целью последнего этапа изготовления гистологического препарата?

8.2 Контрольные задачи:

1 На занятии студент рассматривает микропрепарат под микроскопом с увеличением объектива в 40 раз и окуляра в 15 раз. Во сколько раз видимое изображение структур больше истинного?

2 При проведении хирургической операции возникла необходимость в гистологическом анализе оперируемого органа. Какие методы гистологического следует при этом использовать?

3 На лабораторном занятии по гистологии студент изучил микропрапарат при малом увеличении микроскопа, а затем хотел рассмотреть интересующую его структуру при большом увеличении, но несмотрия на попытки сфокусировать изображение, четкости он не добился, а стекло препарата разбилось. Какие ошибки были допущены при изучении микропрепарата?

4 При изучении микропрепарата в световом микроскопе интересуемая структура находится у края поля зрения, справа. В какую сторону следует переместить микропрепарат на предметном столике микроскопа, чтобы она оказалась в центре поля зрения?

Устройство микроскопа

Основным прибором, который используют студенты на занятиях, является световой микроскоп. Он позволяет получить увеличенное и обратное изображение объекта.

Полный размер

1. Схема - строение светового микроскопа. В микроскоп входят 3 системы - оптическая, осветительная и механическая.

1. Оптическая система включает объектив и окуляр. а) Объектив (1) - это система линз, вставляемая в тубус (2) снизу и непосредственно направляемая на объект (отсюда - и название). Обычные увеличения объектива: 8 , 20 , 40 (сухие объективы), 90 (иммерсионный объектив). При использовании последнего объектива его следует погрузить в каплю кедрового (иммерсионного) масла, нанесённую на покровное стекло препарата. б) Окуляр (3) вставляется в тубус сверху. Применяются окуляры с увеличением 7, 10, 15. в) Результирующее увеличение микроскопа - произведение увеличений объектива и окуляра, например: 20 10 = 200 раз.

2. Осветительная система - источник света, зеркало, конденсор и диафрагма. а) Источник света (4) может быть встроен в микроскоп, а может находиться и вне микроскопа (пример - обычная настольная лампа). б) Зеркало (5) собирает лучи от источника и направляет их на препарат снизу. Одна поверхность зеркала - плоская, вторая - вогнутая; последняя используется при искусственном освещении. в) Конденсор (6) состоит из линз, которые фокусируют лучи света на препарате. Поднимая и опуская конденсор (с помощью винта), можно настраивать фокусировку лучей. г) Диафрагма (7) вмонтирована в конденсор; это система непрозрачных пластинок с отверстием посередине. Она ограничивает световой поток, падающий на препарат. При использовании объективов с большим увеличением отверстие диафрагмы следует уменьшить - для ослабления сферической аберрации.

3. Механическая система - тубус (2), штатив (8), колонка (9) и предметный столик (10). а) С колонкой связаны макро- и микрометрический винты, которые поднимают и опускают тубус для фокусировки изображения объекта на сетчатке глаза наблюдателя. Макровинт используется при работе на малом увеличении, а микровинт - на большом. б) Предметный столик может перемещаться в горизонтальной плоскости, что позволяет менять участки препарата, попадающие в поле зрения. В итоге, световые лучи проходят следующий путь: источник света (4) зеркало (5) конденсор (6) диафрагма (7) препарат объектив (1) тубус (2) окуляр (3). Т.е. микроскопия ведётся в проходящем свете, для чего препарат должен быть достаточно тонким. Заметим также, что микроскоп даёт перевёрнутое изображение объекта.