10.4. Приготування поживного середовища Мурасіге-Скуга (м-с)

Хід роботи

Маточні розчини солей готують на дистильованій воді і мають наступний склад:

1) NH₄NO₃, KNO₃, КН₂РО₄, MgSO₄•7 H₂O (кожну сіль розчиняють в окремому стаканчику при нагріванні, а потім зливають і об'єм доводять до 1 л, причому розчин MgSO₄•7 H₂O вливають останнім без нагрівання в охолоджену суміш, що запобігає випаданню осаду);

2) CaCI₂;

3) хелат заліза (розчин FeSO₄ і Na₂ ЕДТА необхідні для утворення хелату заліза), нагрітий до кипіння;

4) мікроелементи.

Отримані розчини макро- і мікроелементів зливають в склянки з притертою пробкою (хелат заліза – в темну склянку), помічають етикеткою і поміщають в холодильник.

Для приготування концентрованих розчинів вітамінів беруть 10-кратні навіски і розчиняють їх (кожен вітамін окремо) в 10 мл води, 1 мл містить порцію вітаміну, необхідну для приготування 1 л розчину по прописи Мурасіге-Скуга. Зберігають розчини у флаконах від пеніциліну в замороженому стані.

Таблиця 9

Склад поживних середовищ, що використовують

при культивуванні клітин і тканин, за Р.Г. Бутенко (1999)

Компонент середовища	Концентрація поживних середовищ, мг/л
	Мурасіге і Скуга, 1962	Гамборга і Евелега, 1968	Уайта, 1939	Нича і Нич, 1974-1975
KNO3	1900	3000	81	950
NH4NO3	1650	-	-	720
Ca (NO3)2	-	-	142	-
Ca (NO3)2 · Н2О	-	-	-	-
(NH4)2SO4	-	134	-	-
MgSO4 · 7H2O	370	500	74	185
CaCI2·H2O	-	-	-	166
CaCI2· 2 H2O	440	150	-	-
СаCI	-	-	65	-
КН2РО4	170	-	12	68
NaH2 PO4 · H2O	-	150	-	-
MnSO4·H2O	-	10	-	-
MnSO4 · 4 H2O	22,3	-	-	25
ZnSO4 · 4 H2O	8,6	-	-	-
ZnSO4 · 7 H2O	-	2	-	10
Н3ВО4	6,2	3	-	10
CuSO4 · 5 H2O	0,025	0,075	-	0,025
Na2 MoO4 · 2H2O	0,25	0,25	-	0,25
CoCI2 · 6 H2O	0,025	-	-	-
FeSO4 · 7 H2O	27,8	-	-	2
Na EDTA·2 H2O	37,3	-	-	3
Секвестрен 330-Fe	-	28	-	-
Мезоинозит	100	-	-	200
Аскорбиновая кислота	-	-	-	3
Тиамин-HCI	0,5	-	-	3
Пиридоксин-HCI	0,5	-	-	1
Никотиновая кислота	0,5	-	-	-
Сахароза	30 000	20 000	2000	60 000
Агар «Дифко», гельрит, агароза	-	-	-	7000

Розчини фітогормонів готують наступним чином: беруть 10 мг речовини, ауксини (2,4 Д, ІОК, НОК) розчиняють в 0,5…2,0 мл етанолу, цитокініни (кинетін, зеатін, БАП) – в невеликій кількості 0,5 н HCI або КОН, абсцизової кислоти (АБК) – в 70%-ном етанолі. Потім розчини підігрівають (крім АБК) і заливають водою до об'єму 100 мл. У холодильники їх можна зберігати при температурі 40°С не більше 1 місяця. На основі маточних розчинів готують поживне середовище М-С, яке буде використано на наступних заняттях.

Хід приготування поживного середовища наступний: в хімічний стакан місткістю 1 л поміщають 30 г сахарози, доливають дистильованою водою приблизно до 400 мл і після розчинення сахарози додають необхідні кількості маточних розчинів макросолей, мікросолей, вітамінів і гормонів. Необхідно обов'язково виміряти рН розчину. Якщо рН перевищує 5,5…5,6, в поживне середовище вносять 0,1%-ний розчин НCI. Одночасно в іншому стакані попередньо замочений для набухання агар-агар нагрівають, помішуючи на електроплитці до повного розчинення. Потім його зливають з приготованим розчином і доводять об'єм до 1 л. Поживне середовище розливають у пробірки (приблизно на 1/3 об'єму), закривають їх ватними пробками або алюмінієвою фольгою і стерилізують в автоклаві.