6.2.4. Приготування розчинів барвників

Розчини метиленового синього. Для фарбування препаратів живих культур дріжджів готують 0,01%-й і 0,001%-й водні розчини метиленового синього. Для цього відповідно 10 мг або 1 мг сухого барвника розчиняють в 100 мл дистильованої води.

Для фарбування фіксованих препаратів спочатку готують насичений спиртовий розчин метиленового синього, який перед використанням розводять дистильованою водою (1:10 або 1:40). Насичений розчин метиленового синього в 95%-му етанолі готують, додаючи 10 г сухого барвника до 100 г етанолу або 3 г барвника до 100 см³ етанолу. Розчинення проводять протягом 3 діб, періодично струшуючи або перемішуючи, потім розчин відфільтровують.

Фарбувальну здатність розчинів метиленового синього підсилює додавання в розчин лугу. Тому в деяких випадках при мікроскопічних дослідженнях використовують лужний розчин метиленового синього. Для його приготування 30 см³ насиченого спиртового розчину метиленового синього розбавляють 100 см³ дистильованої води і додають 1 см³ 1%-го розчину гідроксиду калію.

Розчини фуксину. Для отримання насиченого спиртового розчину фуксину (фуксин основний), розчиняють 10 г сухого барвника в 100 см³ етанолу. Розведений розчин фуксину отримують додаванням до 10...20 см³ насиченого розчину фуксину 100 см³ дистильованої води. Водні розчини фуксину отримують, розчиняючи 1...10 г сухого барвника в 100 мл дистильованої води.

Карболовий фуксин Ціля готують, розтираючи в порцеляновій ступці 1 г фуксину з 10 см³ етанолу. Потім при розтиранні додають 5 г фенолу (карболової кислота) і поступово, продовжуючи розтирати, доливають 100 см³ дистильованої води. Карболовий фуксин можна приготувати, розчиняючи 10 см³ насиченого спиртового розчину фуксину в 100 см³ 5%-го водного розчину фенолу. Іноді для звичайного фарбування застосовують карболовий фуксин, розведений у 10 разів дистильованою водою. Але цей розчин не стійкий при зберіганні і тому готується перед застосуванням.

Розчин Люголя. 20 г йодиду калію розчиняють в 100 мл дистильованої води і додають 7 г йоду. Для прискорення розчинення суміш розтирають у порцеляновій ступці.

Розчин судану ІІІ. Судан III - азокраситель, не розчиняється у воді, але здатний розчинятися в рідких жирах (маслах). Для забарвлення препарату з метою виявлення жирових включень у клітинах мікроорганізмів звичайно використовують розчин судану III в суміші рівних обсягів етанолу та гліцерину. Концентрація барвника в розчині повинна бути не менше 0,5%. Для приготування розчину сухий порошок судану ІІІ розчиняють в 96%-му етиловому спирті, до якого потім додають рівний об'єм гліцерину. Для забарвлення препаратів можна також використовувати розчини судану III в молочній кислоті, в 70%-му етанолі та в суміші 70%-го етанолу та ацетону.

6.2.5. Оцінка фізіологічного стану дріжджів за мікроморфологічними характеристикам.

При оцінці фізіологічного стану дріжджів враховують середній розмір і форму клітин, вік, активність брунькування або ділення, наявність мертвих клітин. Досліджується і внутрішня структура клітин (товщина стінки, однорідність цитоплазми, наявність і розміри вакуолей, наявність включень).

Подрібнення дріжджових клітин і спотворення їх форми вказує на нестачу харчування, витягування клітин може свідчити про нестачу кисню. Нестача харчування також приводить до вичерпання резервних речовин, цитоплазма стає зернистої, пропадають вакуолі. З віком товщає оболонка клітини, цитоплазма стає зернистої, з'являються і збільшуються в розмірах вакуолі, укрупнюються крапельки жиру і зменшується вміст волютину. Вважають, що дріжджі активно брунькуються або подвоюються, якщо число клітин, що брунькуються або діляться, складає не менше 50% загального їх числа. Мертві клітини при вирощуванні дріжджів на темних середовищах набувають темний колір. На нефарбованих середовищах вони залишаються безбарвними, але на відміну від живих клітин краще сприймають барвники. Забарвлення проводять свіжоотриманим водним розчином метиленового блакитного (розведення 1:10000). Живі клітини залишаються безбарвними, а мертві забарвлюються. Живі клітини під дією барвника гинуть, тому забарвлений препарат досліджують відразу ж після приготування. У нормальному стані число мертвих клітин не перевищує 1...5%.