5.1. Допоміжні операції
5.1.1. Пересівання мікроорганізмів
У мікробіологічної практиці постійно зустрічається необхідність перевести культуру мікроорганізмів з однієї судини в іншій. Така операція називається пересів мікроорганізмів. Пересівання роблять при виділенні чистої культури мікроорганізму, при необхідності розмножити мікроорганізми, при вивченні мікрофлори об'єктів і для освіження старої культури (рис. 6).
Пересівання мікроорганізмів слід проводити в асептичних умовах в приміщенні з чистим повітрям, краще у відгородженої частині кімнати (заскленому боксі), при найменшому русі повітря. Стіл повинен бути чистим, попередньо протертим змоченим у спирті ватним тампоном. Перед роботою необхідно ретельно вимити руки, одягнути халат.
Рис. 6. Посів культури з пробірки у пробірку
Посів культури проводиться над полум'ям спиртового пальника в умовах, що забезпечують найменшу можливість попадання сторонньої мікрофлори в поживне середовище, що засівають.
Посів проводиться бактеріальної платинової або хромонікелевої петлею, що впаяна в скляну паличку або укріплена в спеціальному тримачі. При посіві бактеріальна петля береться у праву руку за держатель, затискається між великим і вказівним пальцями і стерилізується прожаренням на полум'ї пальника (рис. 6,а). Після розжарювання докрасна петлі обпалюється весь дротик і частина утримувача, що дотикається до нею. Потім в ліву руку беруть дві пробірки (одна з культурою дріжджів, яка служить посівним матеріалом, а інша зі скошеним поживним середовищем). Пробірки тримають в похилому положенні. Мізинцем і безіменним пальцем правої руки захоплюють пробки пробірок і притискають до долоні правої ж руки; ліва рука робить обережні обертальні рухи, а права виймає пробки над полум'ям (рис. 6,б). При такому обережному витяганні пробок повинно виключатися різке входження навколишнього повітря у пробірки, що відкриваються, а разом з ним і сторонніх мікроорганізмів. Всю цю операцію проводять швидко, продовжуючи тримати в правій руці обпалену бактеріальну петлю, не торкаючись нею будь-яких предметів. Після вилучення пробок горловини пробірок відразу ж обпалюють по колу на полум'ї пальника, потім вводять в пробірку з культурою петлю і охолоджують її, торкаючись до внутрішньої поверхні судини, після чого петлею підхоплюють шматочок або краплину посівного матеріалу (рис. 6,в). Відібраний посівний матеріал бактеріальної петлею переносять в пробірку зі стерильним поживним середовищем (рис. 6,г). Обидві пробірки закривають над полум'ям пальника пробками (рис. 5,д). Після посіву бактеріальну петлю обов'язково обпалюють (рис. 6,е).
При пересіванні мікроорганізмів, що знаходяться у вигляді суспензії в рідкому середовищі, крім бактеріальної петлі використовують градуйовані піпетки і піпетки Пастера. Піпетки повинні бути стерильними, загорнутими у папір. При розгортанні паперу і наступних операціях не можна чіпати руками нижню частину піпетки і торкатися нею до сторонніх предметів. Робота з посівним матеріалом проводиться з дотриманням тих же правил, що і при роботі з бактеріальною петлею. Використані піпетки поміщають у дезінфікуючий розчин і повторно використовують тільки після стерилізації.
У мікробіологічної практиці для кількісних вимірювань часто працюють з суспензіями мікроорганізмів. В якості суспензійних рідин використовують стерильну водопровідну воду. Змішуючи суспензію мікроорганізмів з певним обсягом води, можна добитися необхідного розведення. Висів на щільні середовища з підготовленою суспензії роблять піпеткою, вносячи в кожну чашку із середовищем по 0,05 см3 або по одній краплі виміряного об'єму. Для кожного розведення висів здійснюють не менше ніж у три чашки, і результати вимірювань потім усереднюють.